TGF-β及其受體在激光脫毛后毛囊生長周期中的表達(dá)變化研究.pdf

1、多毛在激光整形科較為常見，常給患者帶來嚴(yán)重的精神負(fù)擔(dān)和心理壓力，臨床目前較為有效和常用的治療方法為激光脫毛，激光整形科和皮膚科學(xué)者雖已對激光脫毛作了大量研究，但一般都停留在臨床研究上，有關(guān)激光脫毛后組織學(xué)變化及分子機(jī)制的研究較少。 為了尋找一種最適合的激光脫毛動物模型，科研工作者們已經(jīng)研究了許多動物的皮膚結(jié)構(gòu)，包括豚鼠、犬、豬等，在所有研究過的物種中，豬的皮膚結(jié)構(gòu)是和人類最為相似的。西藏小型香豬作為中國獨(dú)特的實(shí)驗(yàn)用小型豬種，具有

2、體型小，遺傳穩(wěn)定，個體差異小等商品豬所不能比擬的優(yōu)點(diǎn)，黑毛白皮的特征尤其適合作為激光脫毛動物模型。 近年來毛囊生物學(xué)及毛發(fā)疾病的病理生理學(xué)正成為國內(nèi)外生物學(xué)界、皮膚科領(lǐng)域、美容學(xué)科的研究熱點(diǎn)。有關(guān)毛發(fā)的基礎(chǔ)研究已取得了很大的進(jìn)展，隨著研究的深入，關(guān)于毛囊誘導(dǎo)和早期形態(tài)發(fā)生的分子機(jī)制逐漸明了，但對于毛囊生長周期精確的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。其可能機(jī)制還涉及生長因子的調(diào)控。已證實(shí)有四大類調(diào)節(jié)因子對毛囊有直接作用，其中，TGF-β是目前研究

3、較多且對毛囊發(fā)育比較重要的因子之一，對調(diào)控毛囊的形態(tài)學(xué)發(fā)生和周期性循環(huán)起著非常重要的作用，但迄今為止，TGF-β及其受體在激光脫毛這一特殊過程中的變化規(guī)律和作用機(jī)制國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。 我們提出假設(shè)：激光可使毛囊休止期延長、毛囊小型化或毛囊永久性破壞的原因：激光的光熱作用、光機(jī)械、光壓強(qiáng)等可能作為激動因素引起局部的炎癥反應(yīng)→分泌炎性因子作用于炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞或黑色素細(xì)胞等→分泌TGFβ→抑制毛囊細(xì)胞增殖，促進(jìn)

4、毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡→達(dá)到脫毛作用。 如果假設(shè)成立，促進(jìn)毛發(fā)由休止期向生長期轉(zhuǎn)變或延長毛發(fā)生長期從而延長生長周期均可延長毛發(fā)生長，反之則可治療多毛。局部應(yīng)用TGF-β拮抗劑有望治療雄激素性脫發(fā)及其它脫發(fā)的治療，應(yīng)用其激動劑則可以治療多毛癥等生長期延長的毛發(fā)疾病。為開發(fā)治療毛發(fā)疾病相關(guān)新藥的研發(fā)提供參考。 目的: 一、建立激光脫毛動物模型，研究激光脫毛后毛發(fā)數(shù)量的變化、毛囊及皮膚組織學(xué)改變和超微結(jié)構(gòu)的改變及毛囊周期

5、生物學(xué)變化。 二、研究TGF-β及其受體在激光脫毛過程中的變化規(guī)律，探討其在激光脫毛中的作用。 第一部分建立激光脫毛動物模型并進(jìn)行組織學(xué)研究方法: 動物實(shí)驗(yàn)選用4-6月齡黑毛白皮西藏小型香豬12只，按臨床方法激光脫毛，肉眼觀察治療區(qū)術(shù)前、術(shù)后毛發(fā)的變化；在術(shù)前、術(shù)后即刻、1h及1、3、5、10、15、30、60天分別取材，常規(guī)HE染色，光鏡觀察毛囊及皮膚組織學(xué)改變及電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)的改變； RdUTP缺口末端標(biāo)記

6、法（Tunel法）檢測毛囊細(xì)胞的凋亡情況；銀染光鏡觀察和透射電鏡觀察激光脫毛前后毛囊黑色素含量的變化。 結(jié)論: 黑毛白皮西藏小型香豬可作為臨床激光脫毛的良好的動物模型。激光照射后通過破壞毛囊和誘導(dǎo)毛囊直接由生長期直接進(jìn)入退行期或靜止期，達(dá)到脫毛的目的，與臨床中激光脫毛治療相符。 本研究初步揭示了激光照射后毛囊組織的病理變化過程。認(rèn)為激光不僅通過直接熱凝固導(dǎo)致細(xì)胞壞死和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡兩方面的作用造成毛囊的不可逆損傷，

7、達(dá)到永久性脫毛的目的；而且激光脫毛后誘導(dǎo)毛囊由生長期直接進(jìn)入退行期或靜止期，毛發(fā)暫時停止生長，從而達(dá)到非永久性脫毛的目的。激光脫毛后毛囊組織中的黑色素含量進(jìn)一步減少甚至消失，原因可能是激光照射后部分黑素細(xì)胞壞死和凋亡而殘余的部分黑素細(xì)胞不再生成黑色素顆粒。 第二部分激光脫毛前后TGF-β異構(gòu)體及其受體在激光脫毛后的表達(dá)研究方法: 將激光脫毛術(shù)前、術(shù)后即刻、1h及1、3、5、10、15、30、60天標(biāo)本采用免疫組織化學(xué)方法

8、檢測TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2蛋白表達(dá)情況，采用RT-PCR的方法檢測4 TGF-β1mRNA、 TGF-βR1 mRNA、TGF-β2 mRNA、TGF-βR2mRNA、TGF-β3 mRNA及TGF-βR3 mRNA表達(dá)情況結(jié)論: 激光脫毛前TGF-β1表達(dá)較弱，且主要分布于毛囊以外的角質(zhì)形成細(xì)胞，激光脫毛后TGF-β1表達(dá)逐漸增強(qiáng)后再減弱，且主要分布于毛囊中，和毛囊細(xì)胞凋亡的步調(diào)相一致，因此我們認(rèn)為激光脫

9、毛后TGF-β1表達(dá)增強(qiáng)，促使殘余毛發(fā)從生長后期向退行期轉(zhuǎn)換，可能是通過抑制角質(zhì)細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡實(shí)現(xiàn)的；抑制毛囊細(xì)胞增殖，促進(jìn)毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，達(dá)到脫毛的目的。 TGF-βR1主要分布于毛囊外根鞘，激光脫毛術(shù)前TGF-βR1表達(dá)較弱，激光脫毛后TGF-βR1表達(dá)逐漸增強(qiáng)后再減弱，和TGF-β1的表達(dá)相同，因此我們認(rèn)為激光脫毛后TGF-βR1表達(dá)增強(qiáng)，促使殘余毛發(fā)從生長后期向退行期轉(zhuǎn)換，達(dá)到脫毛的目的。 激光脫毛術(shù)前

10、TGF-β2表達(dá)較弱，激光脫毛后TGF-β2表達(dá)逐漸增強(qiáng)后再減弱，和毛囊細(xì)胞凋亡的步調(diào)相一致，因此我們認(rèn)為激光脫毛后TGF-β2表達(dá)增強(qiáng)，可能是通過誘導(dǎo)毛囊上皮細(xì)胞凋亡和內(nèi)源性的細(xì)胞凋亡途徑促進(jìn)毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡從而促使殘余毛發(fā)從生長期向退行期轉(zhuǎn)換，達(dá)到脫毛的目的。 激光脫毛后TGF-βR2在毛囊外根鞘細(xì)胞中表達(dá)逐漸增強(qiáng)后再減退，但略滯后于TGF-βR1，促使毛囊進(jìn)入退行期，達(dá)到脫毛的目的。 激光脫毛術(shù)前、術(shù)后即刻、1