藥用植物半枝蓮的組織培養(yǎng)及多倍體誘導(dǎo).pdf

1、藥用植物半枝蓮(Scutellaria barbata D．Don)是一種應(yīng)用范圍廣、使用量大和藥效功能多的傳統(tǒng)中藥，近年研究表明還具有良好的抗腫瘤作用。誘導(dǎo)多倍體能夠提高藥用植物藥用成分的報(bào)道屢見(jiàn)不鮮，這種方法切實(shí)可行。本文以此為理論依據(jù)，先建立半枝蓮的離體快繁體系，秋水仙素處理莖尖誘導(dǎo)半枝蓮多倍體植株并進(jìn)行鑒定，最后測(cè)定已確定的多倍體株系的藥用成分總黃酮含量。 以半枝蓮盆栽苗的莖尖為起始材料，用含2％有效氯的NaC10溶液

2、消毒5rain，轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基中生長(zhǎng)獲得無(wú)菌小苗。分別切取無(wú)菌小苗1cm長(zhǎng)的莖尖、0.8cm長(zhǎng)帶腋芽的莖段和不帶腋芽的莖段為組織培養(yǎng)的外植體。 半枝蓮的離體快繁體系建立：以1cm莖尖為外植體，用激素6-BA和IBA組合誘導(dǎo)叢生芽，MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L誘導(dǎo)的叢生芽最多，增殖系數(shù)為6.5；以1cm莖尖為外植體，用激素6-BA和NAA組合誘導(dǎo)叢生芽，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0 mg

3、/L誘導(dǎo)的叢生芽最多，增殖系數(shù)為6.1；以0.8cm帶腋芽的莖段為外植體，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0mg/L誘導(dǎo)的叢生芽最多，增殖系數(shù)為5.7；以0.8cm帶腋芽的莖段為外植體橫放在培養(yǎng)基上，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0 mg/L誘導(dǎo)的叢生芽最多，增殖系數(shù)為4.8。故誘導(dǎo)叢生芽的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1 mg/L。 半枝蓮愈傷的誘導(dǎo)：以葉片和莖段為外植體，在激素6

4、-BA和NAA組合的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷，均未成功。 半枝蓮多倍體的誘導(dǎo)鑒定：0.2％的秋水仙素浸泡莖尖3h誘導(dǎo)的多倍體最多，誘導(dǎo)率高達(dá)10％，存活率為25％。分別從半枝蓮的形態(tài)特征和細(xì)胞學(xué)方面對(duì)對(duì)照和多倍體進(jìn)行了比較，并利用流式細(xì)胞儀對(duì)4個(gè)株系進(jìn)行了鑒定，均為多倍體嵌合體。測(cè)定其中3個(gè)半枝蓮多倍體株系的藥用成分總黃酮的含量，分別是1.88％、1.85％和1.69％，未處理的正常對(duì)照株系是1.67％；加樣回收率為99.1％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)