散發(fā)性結(jié)直腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及多個(gè)基因甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、目的:
　　1、檢測(cè)8個(gè)微衛(wèi)星（Microsatellite，MS）位點(diǎn)BAT-25、BAT-26、D8S264、D8S135、D9S1748、D9S942、D11S2077及 D11S4111的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(Microsatellite instability,MSI)在散發(fā)性結(jié)直腸癌(Sporadic colorectal cancer,SCRC)中的發(fā)生頻率、分類(lèi)，并探討MSI與臨床病理特征的關(guān)系。
　　2、檢測(cè)hM

2、LH1基因、p16基因、TSLC1基因啟動(dòng)子在SCRC中的甲基化狀態(tài)，探討各基因甲基化狀態(tài)與臨床病理特征的關(guān)系以及這三個(gè)基因啟動(dòng)子異常甲基化在SCRC中的診斷價(jià)值。
　　3、觀察SCRC各MSI分類(lèi)組hMLHl基因、p16基因、TSLC1基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)，探討hMLHI基因、p16基因及TSLC1基因啟動(dòng)子甲基化和MSI的關(guān)系，以期進(jìn)一步了解SCRC的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：
　　1、提取45例SCRC患者癌組織和

3、癌旁組織中的DNA，采用PCR、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳及硝酸銀染色法檢測(cè)8個(gè)MS位點(diǎn)的MSI。
　　2、將45例SCRC患者癌組織和癌旁組織的DNA用甲基化試劑盒修飾后，采用特異性甲基化PCR（Methylation specific PCR，MSP）方法檢測(cè)hMLHl基因、p16基因及TSLC1基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果:
　　1、8個(gè)MS位點(diǎn)中除了D8S135外其余7個(gè)MS位點(diǎn)均發(fā)生了一定頻率的MSI（9.

4、5％～24.4%），其中D8S264（20.9%）、D9S942（19.0%）和D11S4111（24.4%）三個(gè)位點(diǎn)MSI發(fā)生頻率較高。各MS位點(diǎn)的MSI發(fā)生頻率在性別、年齡、腫瘤大小、病理類(lèi)型、Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)。
　　2、聯(lián)合8個(gè)位點(diǎn)MSI的發(fā)生頻率，低齡組MSI的發(fā)生頻率（70.0%，14/20）顯著高于高齡組(24.0%,6/25);無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（DukesA+B）MSI的

5、發(fā)生頻率（55.2%，16/29）顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（DukesC+D）（25.0%，4/16），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。性別、腫瘤部位、腫瘤大小和病理類(lèi)型組組間MSI發(fā)生率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)。
　　3、45例SCRC患者中有45.4%(20/45)的標(biāo)本至少在一個(gè)位點(diǎn)上發(fā)生了MSI，其中高頻的微衛(wèi)星不穩(wěn)定（high-frequency microsatellite instability，MSI-H）占15

6、.6%（7/45)，低頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定（low-frequency microsatellite instability，MSI-L）占28.9%（13/45)，微衛(wèi)星穩(wěn)定（microsatellite stability，MSS）占55.6%（25/45）。
　　4、MSI-H在性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、病理類(lèi)型、Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)。
　　5、45例SCRC中，三個(gè)基因啟

7、動(dòng)子在癌組織甲基化率均明顯高于癌旁正常組織組，hMLH1基因（37.8％ Vs15.6％）、p16基因（60.0％ Vs31.1％）、TSLC1基因(73.3％ Vs53.3％)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　6、45例SCRC中，hMLH1基因、p16基因、TSLC1基因啟動(dòng)子甲基化在性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、病理分型、Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)。
　　7、在45例SCRC

8、中，MSI-H組hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生率顯著高于MSI-L和MSS組（85.7% Vs30.8%和28.0%），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MSI-H組p16基因和TSLC1基因甲基化發(fā)生率與MSI-L和MSS組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)。
　　8、聯(lián)合hMLH1基因、p16基因和TSLC1基因三個(gè)基因啟動(dòng)子甲基化情況，發(fā)現(xiàn)至少一個(gè)基因啟動(dòng)子甲基化的發(fā)生率為91.1%（41/45），3個(gè)基因啟動(dòng)子同時(shí)甲基化的發(fā)

9、生率為17.8%（8/45）。
　　結(jié)論:
　　1、MSI是SCRC的一個(gè)常見(jiàn)的分子改變，且D8S264、D9S942、 D11S4111可能是檢測(cè)SCRC的MSI較為敏感的微衛(wèi)星位點(diǎn)。
　　2、hMLH1、p16和TSLC1三個(gè)基因啟動(dòng)子甲基化均是SCRC中常見(jiàn)的表觀遺傳事件，是SCRC發(fā)生的早期分子事件。
　　3、hMLH1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平與微衛(wèi)星MSI密切相關(guān)，推測(cè)hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化使hMLH