散發(fā)Ⅱ期結(jié)直腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與臨床病理特征及相關(guān)基因表型分析.pdf

1、目的：
　　結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，WHO關(guān)于全球癌癥狀況的最新數(shù)據(jù)顯示，結(jié)直腸癌發(fā)病率在惡性腫瘤中居第4位，腫瘤死亡原因第3位。結(jié)直腸癌發(fā)病率呈逐年升高趨勢，成為危害人類生命健康的重要疾病。目前關(guān)于結(jié)直腸癌的發(fā)生一般認為是涉及遺傳和環(huán)境等諸多因素相互作用所致的一個多步驟、多基因改變的復雜過程。而結(jié)直腸癌遺傳傾向是惡性腫瘤中最明顯的一個，目前已得到公認。1980年 Wyman等發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星序列，研究發(fā)現(xiàn)遺傳性非息肉病性結(jié)直腸

2、癌（HNPCC）與之有著重要關(guān)聯(lián)，研究還發(fā)現(xiàn)約7％-28%散發(fā)結(jié)直腸癌有微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象[12]，同時研究也發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定的散發(fā)結(jié)直腸癌具有獨特的臨床病理特征，但就微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與散發(fā)結(jié)直腸癌之間的病理特征目前還沒有定論。根據(jù)NCCN指南II期結(jié)直腸癌在診療中有其特殊的一面，本次研究進一步探索II期結(jié)直腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定與臨床病理特征、胸苷酸合成酶及相關(guān)基因表達之間的關(guān)系，同時為后期隨訪進一步研究微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與結(jié)直腸癌預后提供準備。本

3、研究另外一個優(yōu)點是既往關(guān)于微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的研究多是以免疫組化為基本實驗，通過錯配修復蛋白的表達情況來間接推導微衛(wèi)星不穩(wěn)定情況，但本研究是PCR聯(lián)合毛細管電泳法通過對微衛(wèi)星序列進行分析進而判斷出微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)，為研究的準確性提供了依據(jù)。
　　方法：
　　研究對象：收集2013年12月之2015年10月間所有于我院行根治術(shù)的結(jié)直腸癌病例，通過完整原始病歷及術(shù)后病理篩選出符合要求的散發(fā)II期結(jié)直腸癌患者，再通過我科基因庫選出已在

4、廣州益善生物技術(shù)有限公司做過微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測的病例。
　　資料搜集：通過重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院電子病歷系統(tǒng)查閱所需病例的原始病歷，根據(jù)國內(nèi)外文獻及結(jié)合臨床經(jīng)驗，記錄所有可能與微衛(wèi)星狀態(tài)有關(guān)的臨床病理特征（性別、年齡、BMI、病理類型、大體類型、T分期、腫瘤標志無表達量、發(fā)病部位、是否合并糖尿?。?。使用 EXCEL表格建立完整數(shù)據(jù)庫，在數(shù)據(jù)收集同時完善數(shù)據(jù)庫。對病例中同時檢測的其他基因也納入數(shù)據(jù)庫。
　　數(shù)據(jù)分析：通過MS

5、I檢測的結(jié)果，將上述病例分為MSI-H結(jié)直腸癌組及非 MSI-H結(jié)直腸癌組（包括低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定組及微衛(wèi)星穩(wěn)定組）。對數(shù)據(jù)庫的病理資料及其他基因資料進行統(tǒng)計，通過卡方檢驗比較MSI-H結(jié)直腸癌及非MSI-H結(jié)直腸癌的臨床病理特征，通過t檢驗分析MSI-H結(jié)直腸癌及非MSI-H結(jié)直腸癌其他基因表達情況。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)納入標準、排除標準及病歷完整性共篩選出105例符合要求的病例，其中男性有62人，女性43人；所有患者中年

6、齡最小者35歲，年齡最大者83歲，平均年齡61.70歲，中位年齡62歲，患者年齡呈正態(tài)分布。詳細資料分析如下：
　　微衛(wèi)星不穩(wěn)定性表達情況：微衛(wèi)星穩(wěn)定者（MSS）88例，百分比83.8%；低度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSS-L）2例，百分比1.9%；高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MIS-H）15例，百分比14.3%。
　　臨床病理特征：MSI-H組、非MSI-H組患者在腫瘤發(fā)生位置、腫瘤分化程度上存在明顯差異（P＜0.05），MSI-H結(jié)直腸癌多

7、發(fā)生在右半結(jié)腸且以低分化為主要表現(xiàn)，多含有粘液癌成份。而在2組患者在性別、年齡、BMI、腫瘤大體類型、腫瘤浸潤深度、是否患有糖尿病及術(shù)前腫瘤標志物表達水平均無明顯差異。
　　與其他基因關(guān)聯(lián)性：微衛(wèi)星狀態(tài)與TYMS-RNA表達水平具有關(guān)聯(lián)性， MSI-H組TS-RNA呈高表達趨勢（P＜0.05）。微衛(wèi)星狀態(tài)與PIK3CA基因突變具有關(guān)聯(lián)性，MSI-H結(jié)直腸癌 PIK3CA基因突變率更高（P＜0.05）；進一步分層分析發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星狀態(tài)與

8、 PIK3CAE20基因的突變具有明顯關(guān)聯(lián)性P=0.014（P＜0.05），而微衛(wèi)星狀態(tài)與PIK3CAE9基因的突變關(guān)聯(lián)性不明顯P=0.541（P＞0.05）。而MSI-H組、非MSI-H組的ERCC1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3基因mRNA表達水平無明顯差異，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與BRAF基因、KRAS基因、UGT1A1基因的狀態(tài)無明顯關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論：
　　1.散發(fā)的II期結(jié)直腸癌中有14%表現(xiàn)出高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定

9、性；微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與結(jié)直腸癌腫瘤發(fā)生位置、腫瘤分化程度有密切關(guān)聯(lián)，而與患者的性別、年齡、BMI及腫瘤大體類型、浸潤深度、患者是否糖尿病及術(shù)前腫瘤標志物表達水平無明顯相關(guān)性。
　　2.MSI-H結(jié)直腸癌其TYMS-RNA表達水平高，MSI-H患者較非MSI-H者PIK3CA基因突變率更高，具體為MSI-H與PIK3CAE20基因突變率關(guān)聯(lián)有統(tǒng)計學意義；而微衛(wèi)星狀態(tài)與 ERCC1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3表達水平均無明