血管內(nèi)皮祖細胞移植對大鼠急性胰腺炎胰腺微循環(huán)改善作用的實驗研究.pdf

1、 目的：本實驗通過檢測血管內(nèi)皮祖細胞( Endothelial progenitor cells , EPCs )移植到?；悄懰徕c誘導(dǎo)的大鼠急性胰腺炎模型的CD133、CD34 免疫組化表達和 HE 染色血管密度的變化,研究血管內(nèi)皮細胞對大鼠急性胰腺炎微循環(huán)的改善作用。方法：1.細胞分離培養(yǎng)和鑒定：選取成年健康 SD 大鼠,取大鼠股骨、脛骨,PBS 液沖洗骨髓腔,收集全部骨髓細胞,制成單核細胞懸液,加入到淋巴細胞分離液中,用密度梯度離

2、心法離心,取中間白膜層的有核細胞,離心洗滌三次。利用差速貼壁法,取培養(yǎng) 48h 后未貼壁細胞,用含 10%的胎牛血清、5ng/ml bFGF、20ng/ml VEGF 的 M199 培養(yǎng)液培養(yǎng)于 6孔板中。培養(yǎng)10d后,免疫組化法和熒光雙染法鑒定細胞。待細胞增殖到移植所需的數(shù)量時,收集細胞,無血清培養(yǎng)基洗滌兩次,用無血清培養(yǎng)基制成單細胞懸液,以備移植。2、大鼠急性胰腺炎模型的建立和EPCs的移植：將72只健康成年雄性大鼠隨機分為正常對照

3、組(A組,n=24),急性胰腺炎模型組(B 組,n=24),急性胰腺炎內(nèi)皮祖細胞移植組(C組,n=24)。將SD大鼠用1%戊巴比妥鈉0.6ml/100g腹腔注射,于胰腺被膜下注射1%?；悄懰徕c1ml(正常對照組被膜下注射同等量生理鹽水),同時行空腸造瘺,術(shù)后均給予腸外營養(yǎng)。C 組通過大鼠頸外靜脈置管注射經(jīng)體外培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細胞。各組于C組移植后第3d、7d、14d三個時間點各取6只大鼠處死并收集胰腺標本甲 醛固定,胰腺組織HE染色后光鏡病

4、理學(xué)檢查,觀察胰腺病理形態(tài)變化,記錄血管密度情況；免疫組織化學(xué)法(SP 法)檢測胰腺組織中CD133、CD34的累積光密度值(IOD值)。以上所收集的數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差( x ±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理；樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析；兩者的相關(guān)性采用直線相關(guān)和直線回歸分析,P<0.05,則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：(1)B組(模型組)和C組(移植組)的病理評分在3d、7d、14d各時間點高于A (對照組)

5、組(P<0.05)。B組的病理評分在7d、14d點高于C組(P<0.05)。(2)C組胰腺組織HE染色隨機選取鏡下微血管數(shù)在7d、14d高于A組(P<0.05),C組微血管數(shù)7d、14d高于B組(P<0.05)。(3)C組胰腺組織CD133的IOD值在各時間點均高于A、B組(P<0.05)。(4)C組胰腺組織CD34的IOD值在各時間點均高于A、B組(P<0.05)。(5)胰腺組織病理評分與CD133的IOD值呈直線相關(guān)(r=0.814