三對(duì)苯丙素類同分異構(gòu)體對(duì)HepG2細(xì)胞系代謝同工酶CYP3A4、1A1酶表達(dá)的研究.pdf

1、目的：化合物結(jié)構(gòu)是決定藥效發(fā)揮的最本質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)選取三對(duì)苯丙素類同分異構(gòu)體補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、阿魏酸和異阿魏酸，討論其結(jié)構(gòu)變化對(duì)HepG2細(xì)胞系藥物代謝同工酶CYP3A4、1A1調(diào)控的影響，并闡述其相關(guān)機(jī)制，從而為臨床中草藥的安全合理使用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.采用MTT比色法測定六種藥物作用48h后對(duì)體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響，計(jì)算IC50，篩選有效濃度。
　　2.采

2、用流式細(xì)胞術(shù)測定六種藥物對(duì)HepG2細(xì)胞周期的影響。
　　3.通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測定經(jīng)六種藥物處理細(xì)胞后HepG2的CYP3A4和CYP1A1的mRNA的表達(dá)變化。
　　4.用免疫熒光法（IF）和蛋白免疫印跡法（WB）定位及定量測定六種藥物對(duì)HepG2中細(xì)胞CYP3A4蛋白酶表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.給藥48h，六種藥物在七個(gè)濃度（6.25~200μg/mL）作用下對(duì)HepG2細(xì)胞系增殖均有抑制作

3、用，并有明顯的劑量依賴關(guān)系。補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、阿魏酸和異阿魏酸均抑制細(xì)胞增殖于G2-M期，而歐前胡素和異歐前胡素阻止細(xì)胞增殖于G2-M期和S期。
　　2.六種藥物均是CYP3A4 mRNA的抑制劑。異補(bǔ)骨脂素的抑制作用比補(bǔ)骨脂素更強(qiáng)；歐前胡素在高中低三個(gè)濃度時(shí)均為CYP3A4 mRNA的弱抑制劑，異歐前胡素的抑制能力明顯強(qiáng)于歐前胡素；異阿魏酸對(duì)CYP3A4 mRNA的抑制作用略強(qiáng)于阿魏酸。
　　3.六種藥物均是CYP1A

4、1 mRNA的抑制劑。補(bǔ)骨脂素對(duì)CYP1A1 mRNA的抑制略比異補(bǔ)骨脂素強(qiáng)；異歐前胡素在低濃度時(shí)（25、50μg/mL）對(duì)1A1 mRNA的抑制作用明顯強(qiáng)于歐前胡素，而在高濃度時(shí)（100μg/mL）兩藥作用程度無太大區(qū)別；異阿魏酸在高中低三個(gè)濃度時(shí)對(duì)1A1 mRNA的抑制作用明顯強(qiáng)于阿魏酸。
　　4.IF和Western Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)CYP3A4蛋白主要存在于細(xì)胞漿中，六種藥物作用后的CYP3A4蛋白表達(dá)明顯降低。
　

5、　結(jié)論:
　　1.六種藥物均為CYP3A4和CYP1A1酶的抑制劑，在臨床藥物合用時(shí)應(yīng)注意因藥物積蓄毒性而造成的不良反應(yīng)。
　　2.六種藥物均阻止了細(xì)胞mRNA和蛋白質(zhì)的合成進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞HepG2增殖，且歐前胡素和異歐前胡素同時(shí)減弱了DNA的合成從而抑制細(xì)胞生長。
　　3.補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、歐前胡素和異歐前胡素此四者同屬呋喃香豆素類化合物，發(fā)現(xiàn)呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)變化是導(dǎo)致此四者對(duì)CYP3A4和CYP1A1的mRNA和蛋