趨化因子MIP-1α動(dòng)員的DC經(jīng)基因修飾后抗胃癌效應(yīng)的研究.pdf

1、本文研究目的：將趨化因子巨噬細(xì)胞炎癥蛋白一1α(macrophageinflammationprotein-1a，MIP-la)在外周血快速動(dòng)員的B220-CDllc+細(xì)胞，體外誘導(dǎo)分化為成熟樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DC)后，經(jīng)基因轉(zhuǎn)染制備表達(dá)腫瘤抗原的DC疫苗，研究其在荷瘤小鼠體內(nèi)的抗胃癌免疫作用。 研究方法： (1)615小鼠通過尾靜脈注射MIP-I~，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(mononuclearc

2、ells，MNCs)，流式細(xì)胞儀分選出B220-CDlle+細(xì)胞，加入鼠粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mGM-CSF)、白介素4(IL-4)和鼠腫瘤壞死因子-α(m~-F-α貫續(xù)培養(yǎng)進(jìn)行誘導(dǎo)分化。 (2)通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、表型和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，檢測(cè)新鮮分離的B220-CDllC細(xì)胞和經(jīng)過細(xì)胞因子培養(yǎng)后的B220-CDllC細(xì)胞的異同。 (3)收集培養(yǎng)后的B220-CDllc+細(xì)胞，以感染復(fù)數(shù)(multiplicityofin

3、fection,MOI)100加入編碼黑色素瘤抗原基因．3(melanomaantigengene-3，MAGE-3)的重組腺病毒(Ad-MAGE-3)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，制備表達(dá)腫瘤抗原的DC疫苗；同時(shí)以MIP-lct動(dòng)員的B220-CDllc+細(xì)胞荷載小鼠前胃癌(mouseforestomachcarc'mima,lVIFC)全腫瘤細(xì)胞抗原制備的DC疫苗(Mm．1a-DC-MFCAg)作為陽性對(duì)照。 (4)將MFC細(xì)胞經(jīng)皮下注射制備小

4、鼠胃癌實(shí)體瘤模型，表達(dá)腫瘤抗原的DC疫苗分別于MFC細(xì)胞接種前后經(jīng)皮下注射，觀察小鼠瘤體生長(zhǎng)和存活情況，研究DC疫苗的免疫保護(hù)及治療作用。 研究結(jié)果： (1)MIP-lct注射615小鼠8小時(shí)后外周血中B220-CDllc+細(xì)胞數(shù)量即升高，48小時(shí)后逐漸達(dá)到高峰，占外周血lVlNCs13．68％4-0．95％。 (2)新鮮分離的B220-CDllc+細(xì)胞不具有成熟DC的特征，而B220-CDllc+細(xì)胞在體外經(jīng)過

5、細(xì)胞因子培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后則具有典型的DC形態(tài)和表型，并在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中具有極強(qiáng)的刺激T細(xì)胞增殖的能力。 (3)MIP．1α動(dòng)員的B220-CDllc+細(xì)胞，在誘導(dǎo)分化為成熟DC后，經(jīng)Ad-MAGE-3轉(zhuǎn)染制備表達(dá)腫瘤抗原的DC疫苗(MI／'．1a-DC-Ad-MAGE-3)，經(jīng)免疫的小鼠接受MFC細(xì)胞接種，小鼠瘤體生長(zhǎng)相當(dāng)緩慢，大小為(2．81±0．90)cm3，MIP．1a-DC-MFCAg陽性對(duì)照組小鼠瘤體大小為(5．25

6、±1．93)cm3，但與前者的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)；而陰性對(duì)照組小鼠瘤體生長(zhǎng)迅速，與實(shí)驗(yàn)組有顯著性差異(P<0．01)。生存曲線顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠接種MFC細(xì)胞后80天，仍有5只小鼠存活(生存數(shù)為5／8)；再次接受MFC細(xì)胞沖擊，繼續(xù)觀察40天后仍存活；MIP．1a-DC-MFCAg陽性對(duì)照組小鼠接受免疫后也有4只小鼠能長(zhǎng)期存活(生存數(shù)為4／8)，與實(shí)驗(yàn)組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P~0．05)；而陰性對(duì)照組小鼠在荷瘤后30天內(nèi)即全部

7、死亡，與實(shí)驗(yàn)組有顯著性差異(P<0．01)。 (4)小鼠皮下接種MFC細(xì)胞5天后，再注射DC疫苗，觀察至第27天，實(shí)驗(yàn)組小鼠瘤體生長(zhǎng)相當(dāng)緩慢，大小僅為(3．464-1．12)em3，MIP-lct-DC-MFCAg陽性對(duì)照組小鼠瘤體大小為(11．07±2．29)cm3，而陰性對(duì)照組小鼠瘤體生長(zhǎng)迅速，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組之間有顯著性差異(P<0．01)。實(shí)驗(yàn)組小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，觀察至荷瘤后40天仍有4只小鼠存活(生存數(shù)為4／8)；M

8、IP．1a-DC-MFCAg陽性對(duì)照組小鼠僅有1只小鼠存活(生存數(shù)為1／8)：而陰性對(duì)照組小鼠在荷瘤后25天內(nèi)即全部死亡，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間有顯著性差異(P<0．01)。 研究結(jié)論： (1)注射趨化因子MIP-1α可快速動(dòng)員B220-CDllc+細(xì)胞進(jìn)入小鼠外周血，這群細(xì)胞在體外經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)可以分化為成熟DC。 (2)MIP-1α動(dòng)員的DC經(jīng)基因轉(zhuǎn)染制備的表達(dá)腫瘤抗原的DC疫苗，在體內(nèi)對(duì)MFC荷瘤小鼠有明顯的免