鎖核酸修飾的分子信標(biāo)用于核酸和蛋白檢測(cè)的研究.pdf

1、分子信標(biāo)具有可轉(zhuǎn)換的發(fā)夾結(jié)構(gòu)、高效的信號(hào)轉(zhuǎn)換機(jī)制、靈活的化學(xué)修飾和簡(jiǎn)便的操作等優(yōu)勢(shì),在生物醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用,特別是在蛋白質(zhì)分析、酶的活性檢測(cè)、活細(xì)胞mRNA追蹤以及生物化學(xué)傳感等領(lǐng)域中體現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。隨著人們對(duì)分析檢測(cè)的要求不斷提高,設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)新型分子信標(biāo),克服常規(guī)分子信標(biāo)在選擇性、靈敏度、抗酶切等方面的不足,是十分必要的。本文將鎖核酸(Locked nucleic acid,LNA)引入分子信標(biāo)的結(jié)構(gòu)中,設(shè)計(jì)了一種新型的莖部修

2、飾鎖核酸的分子信標(biāo)(Locked nucleic acid modifled molecular beacon,LMB),并將它與脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)相結(jié)合應(yīng)用到核酸和蛋白質(zhì)檢測(cè)分析中,實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)物的簡(jiǎn)單、快速、靈敏的分析檢測(cè)。本文開(kāi)展的研究包括:
　　 一、鎖核酸修飾的分子信標(biāo)用于DNA檢測(cè)的研究
　　 基于LMB的特性,結(jié)合DNaseⅠ酶切放大原理發(fā)展了一種DNA檢測(cè)的新方法。當(dāng)目標(biāo)DNA與LMB雜交之后

3、,LMB熒光增強(qiáng),再加入DNaseⅠ,雜交產(chǎn)物被切割,熒光信號(hào)能夠在雜交的基礎(chǔ)上得到進(jìn)一步的提高。而沒(méi)有目標(biāo)DNA存在時(shí)加入DNaseⅠ,LMB熒光基本不變。該方法不但操作簡(jiǎn)便,快速,而且相對(duì)于普通的分子信標(biāo),檢測(cè)下限降低了25倍,達(dá)到1.6×10-10M。
　　 二、鎖核酸修飾的分子信標(biāo)用于RNA檢測(cè)的研究
　　 在DNA放大檢測(cè)的基礎(chǔ)上,將LMB與DNaseⅠ結(jié)合,發(fā)展了一種循環(huán)放大檢測(cè)RNA的新方法。目標(biāo)RNA與L

4、MB雜交之后,LMB環(huán)部被DNaseⅠ水解,溶液熒光增強(qiáng),而RNA則被釋放出來(lái)并與另一個(gè)LMB結(jié)合。如此循環(huán)往復(fù),溶液熒光不斷增強(qiáng),實(shí)現(xiàn)對(duì)RNA放大檢測(cè)的目的。該方法設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、靈敏度高,檢測(cè)下限為1.0×10-13M,與常規(guī)分子信標(biāo)相比,檢測(cè)限降低了4個(gè)數(shù)量級(jí)。
　　 三、鎖核酸修飾的分子信標(biāo)用于蛋白質(zhì)檢測(cè)的研究
　　 在核酸檢測(cè)分析的基礎(chǔ)上,將LMB和DNaseⅠ結(jié)合,以凝血酶作為模型,發(fā)展了一種蛋白質(zhì)檢測(cè)的新方法。在