羅哌卡因-醋酸地塞米松聚乳酸羥基乙酸共聚物微球藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)的觀察.pdf

1、研究背景和目的：
　　 術(shù)后疼痛是在圍手術(shù)期治療過程中的一個(gè)重要問題。注射局部麻醉藥是治療術(shù)后疼痛最直接、有效的鎮(zhèn)痛方法。局部麻醉藥可逆性地阻滯應(yīng)用或注射局部神經(jīng)的傳導(dǎo)而使機(jī)體某個(gè)特定區(qū)域產(chǎn)生暫時(shí)性的感覺喪失,但臨床上所應(yīng)用的水溶性局麻藥不可能通過單次注射達(dá)到長(zhǎng)時(shí)間的鎮(zhèn)痛要求。目前時(shí)效最長(zhǎng)的水溶性局麻藥一次給藥后的鎮(zhèn)痛時(shí)間不超過12小時(shí)。臨床上常采用間斷注射局麻藥或通過體內(nèi)導(dǎo)管植入持續(xù)給藥等方式達(dá)到長(zhǎng)時(shí)間的鎮(zhèn)痛要求,但卻需要比較

2、昂貴的設(shè)備及連續(xù)監(jiān)護(hù)。給藥次數(shù)過多可引起藥物累積可導(dǎo)致呼吸及循環(huán)的抑制,有可能引起局麻藥中毒；長(zhǎng)時(shí)間留置導(dǎo)管容易引起感染或?qū)Ч芤莆患按蛘?所以這些方法并不是解決長(zhǎng)時(shí)間鎮(zhèn)痛的最好途徑。缺乏有效的長(zhǎng)時(shí)間的鎮(zhèn)痛治療方法突顯在疼痛治療領(lǐng)域新的治療方法的必要性。微型成球技術(shù)是近 40年來應(yīng)用于藥物制劑領(lǐng)域的一項(xiàng)新技術(shù),其特點(diǎn)是利用天然的或合成的高分子聚合物作為藥物控制釋放的載體包裹藥物,通過使藥物緩慢釋放,以達(dá)到延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間的目的。目前緩釋微

3、球已運(yùn)用于抗癌藥、抗生素、眼部疾病、基因治療及糖尿病治療等多方面的研究。
　　 有關(guān) PLA 和PLGA 微球應(yīng)用于局部麻醉藥的研究大約有三十年歷史。早在1981 年,Wakiyama N 制備了包含幾種局麻藥的PLA 微球,1994 年 Le Corre 等研究了布比卡因 PLA 和PLGA 微球的制備和體外釋藥特性,均證明以生物降解材料包裹布比卡因制備局部麻醉藥微球緩釋制劑是可行的并且可顯著延長(zhǎng)局麻藥作用時(shí)效。九十年代,Je

4、an,MM,Fletcher D,Passcal LC,Jean PE 等多位學(xué)者以不同動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象研究布比卡因緩釋微球的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)特性,結(jié)果顯示布比卡因緩釋微球可以顯著延長(zhǎng)單次給藥鎮(zhèn)痛作用時(shí)間,并明顯降低體內(nèi)藥物濃度的波動(dòng)。1996 年 Joanne C,1998 年 Christiane D 等人含有少量地塞米松的局部麻醉藥微球可在普通布比卡因微球的基礎(chǔ)上進(jìn)一步延長(zhǎng)了局部麻醉藥鎮(zhèn)痛作用時(shí)間。但至今為止國(guó)內(nèi)處仍無關(guān)于羅哌

5、卡因緩釋微球方面的研究報(bào)道。羅哌卡因結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和代謝途徑與布比卡因相似,但卻具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和心血管系統(tǒng)毒性低的特點(diǎn),更為突出的是羅哌卡因具有高度的感覺-運(yùn)動(dòng)神經(jīng)阻滯分離特性,增加了病人可迅速恢復(fù)運(yùn)動(dòng)的可能性,更適合用于術(shù)后鎮(zhèn)痛、晚期癌痛及三叉神經(jīng)痛等頑固性疼痛的治療,將其制備成 PLGA緩釋微球應(yīng)用于鎮(zhèn)痛領(lǐng)域具有非常深遠(yuǎn)的研究?jī)r(jià)值。
　　 基于以上因?yàn)?我們課題組前期研究了羅哌卡因 PLGA 緩釋微球的制備和體內(nèi)外釋

6、放的特點(diǎn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明以新型長(zhǎng)效局部麻醉藥羅哌卡因包裹藥物,以 PLGA 為載體制備緩釋微球是可行的,且具有顯著緩釋作用。本實(shí)驗(yàn)的目的采用 W/O/W 復(fù)乳方法制備羅哌卡因-地塞米松 PLGA 緩釋微球,通過將羅哌卡因-醋酸地塞米松聚乳酸羥基乙酸共聚物微球植入小鼠坐骨神經(jīng)旁的熱痛阻滯時(shí)效和小鼠體內(nèi)血藥濃度的觀察,考查羅哌卡因-醋酸地塞米松聚乳酸羥基乙酸共聚物微球的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。
　　 研究方法
　　 1.R

7、op-Dex-PLGA-MS的制備:
　　 采用 W1/o/W2 雙重乳化-溶劑揮發(fā)法制備羅哌卡因加或不加醋酸地塞米松PLGA 微球,即(1)精密稱取一定量的羅哌卡因和醋酸地塞米松(加時(shí))分別用雙蒸水和甲醇溶解作為內(nèi)水相;(2)另取適量的PLGA和乳化劑溶于二氯甲烷作為有機(jī)相,然后將(1)與(2)混合,用高速分散均質(zhì)機(jī)均質(zhì) 90s,制成初乳；(3)再將初乳用注射器移入外水相 PVA 水溶液中用高速分散均質(zhì)機(jī)均質(zhì) 90s,制得復(fù)乳

8、；(4)將復(fù)乳放在恒溫磁力攪拌器上持續(xù)攪拌離心、過濾、雙蒸水洗滌三次,收集微球,真空冷凍干燥,儲(chǔ)存在溫度為 4℃的干燥器中待用,高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè) Rop-PLGA-MS 和Rop-Dex-PLGA-MS 羅哌卡因或(和)地塞米松含量。
　　 2.動(dòng)物準(zhǔn)備和分組 昆明小鼠 165 只,平均體質(zhì)量(30±1.231)g,禁食12 h,自由飲水,隨機(jī)分成為 3 組:羅哌卡因-地塞米松微球組(A 組,n=55)、羅哌卡因微

9、球組(B組,n=55)、空白微球組(C組,n=55)；每組又按植入微球后 0.5、1、2、4、8、16、24、36、48、72、96 h時(shí)間點(diǎn)分為 11 組(n=5)。
　　 3.給藥方法與標(biāo)本采集
　　 小鼠麻醉后各組分別在坐骨神經(jīng)周圍的肌肉間隙中植入空白微球、羅哌卡因微球和羅哌卡因-地塞米松微球 400 mg.kg-1,每組按植入微球后0.5、1、2、4、8、16、24、36、48、72、96 h時(shí)間點(diǎn)熱踏板法測(cè)定小

10、鼠舔后足反應(yīng)潛伏時(shí)間,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定5只小鼠,每只小鼠測(cè)定5次,每次間隔 5 min。小鼠在各時(shí)間點(diǎn)熱踏板法測(cè)定結(jié)束后立即摘眼球取血得大約0.8～1.0 ml,0.1ml 1/2000肝素抗凝,3500 r/min 離心 8 min,提取血漿 0.5 ml,-20℃ 保存,以待高效液相色譜儀檢測(cè)(HPLC)。
　　 4.標(biāo)本檢測(cè)和參數(shù)分析
　　 高效液相色譜條件 色譜柱:Shimpack VP-ODS 250×4.6 m

11、m 柱溫:室溫;流動(dòng)相:甲醇:乙腈:水(20mMNaH2PO4,pH=4.6)=18:26:56(V:V:V),流速1.0 ml.min-1；檢測(cè)波長(zhǎng):Ropivacaine 和Bupivacaine 為 210 nm；Dexamethasone的檢測(cè)波長(zhǎng)為 240 nm；內(nèi)標(biāo)液:布比卡因；定量方法:外標(biāo)法。進(jìn)樣量 20 ul,最低檢測(cè)限 0.010 ug.ml-1。WinNonlin3P87DAS2.1.1 軟件行藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分析計(jì)

12、算兩組羅哌卡因微球的血藥動(dòng)力學(xué)參數(shù)曲線下面積(AUC)、峰濃度(Cmax)、峰濃度時(shí)間(Tmax)、消除半衰期時(shí)間(t1/2)。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 所有實(shí)驗(yàn)資料采用SPSS13.0 軟件和Origin6.0 圖象軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和作圖,微球藥效學(xué)和血藥濃度數(shù)據(jù)比較采用隨機(jī)單位組析因因素方法分析,兩微球組血藥不同時(shí)間點(diǎn)上用兩樣本 t 檢驗(yàn)；WinNonlin3P87DAS2.1.1 軟件進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分析,

13、P <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1.通過 W1/O/W2 制備羅哌卡因-醋酸地塞米松 PLGA 和羅哌卡因 PLGA 微球性質(zhì)穩(wěn)定,重復(fù)性好。羅哌卡因載藥量(7.60±0.08)％,包封率(74.10±1.42)％；醋酸地塞米松載藥量(1.54±0.02)％,包封率(60.16±1.55)％。
　　 2.藥效學(xué)結(jié)果:羅哌卡因-地塞米松 PLGA 微球組(Rop-Dex-PLGA-MS、羅哌

14、卡因 PLGA 微球組(Rop-PLGA-MS)和空白微球(PLGA-MS)之間不同時(shí)點(diǎn)的小鼠潛伏時(shí)間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001),各微球組和時(shí)間點(diǎn)之間均有交互作用(P=0.000)。2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí),羅哌卡因-地塞米松PLGA微球組與空白 PLGA 微球組有顯著性差異(P<0.001)；2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí),羅哌卡因 PLGA微球組(Rop-P

15、LGA-MS)與空白微球有顯著性差異(P<0.001)；48小時(shí)和72小時(shí)羅哌卡因-地塞米松微球與羅哌卡因微球組有差異顯著性(P<0.001)。
　　 3.藥代學(xué)結(jié)果:羅哌卡因-地塞米松 PLGA 微球組(Rop-Dex-PLGA-Ms)和羅哌卡因 PLGA 微球組(Rop-PLGA-Ms)血藥濃度不同時(shí)點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001)。兩組微球羅哌卡因藥代學(xué)參數(shù) Cmax、Tmax、AUC、MRT、t1/2 分別為 117.

16、8和119.8 ng.ml-1,24 和12 h,8793.2和6861.15 ng.h.ml-1,43.7491 和38.7743 h,65.799和46.166 h。A、B、C 三組均未測(cè)到地塞米松血藥濃度數(shù)據(jù),C 組羅哌卡因和地塞米松血藥濃度均未測(cè)到。
　　 結(jié)論
　　 1.以PLGA 為載體材料,采用W/O/W乳劑.擴(kuò)散溶劑揮發(fā)法制備 Rop-PLGA-MS和Rop-Dex-PLGA-MS是可行的。
　　

17、 2.藥效動(dòng)力學(xué)的研究表明:(1)載體材料 PLGA 無鎮(zhèn)痛作用；(2)Rop-Dex-PLGA-MS 和Rop-PLGA-MS 兩組微球運(yùn)動(dòng)阻滯效果不明顯；(3)Rop-Dex-PLGA-MS 感覺阻滯時(shí)間為72小時(shí)較 Rop-PLGA-MS 阻滯時(shí)間36小時(shí)顯著延長(zhǎng),羅哌卡因聚乳酸-羥基乙酸微球中包入地塞米松可顯著延長(zhǎng)羅哌卡因的麻醉鎮(zhèn)痛作用。
　　 3.藥代動(dòng)力學(xué)的研究表明:Rop-Dex-PLGA-MS與Rop-PLGA-