抗人尿激酶抗體對(duì)雌性小鼠生殖能力的影響.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、誘導(dǎo)雌性小鼠產(chǎn)生抗人uPA抗體免疫方法和效價(jià)分析 目的:建立一種利用人源uPA分子作為抗原誘導(dǎo)雌性昆明小鼠產(chǎn)生抗人uPA抗體的免疫方法，檢測(cè)該免疫方法的有效性及穩(wěn)定性。 方法:將性成熟雌性昆明小鼠隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組（不予任何處理）、佐劑對(duì)照組（100μl生理鹽水+等體積佐劑）、低劑量免疫組（20μg/100μl uPA+等體積佐劑）、中劑量免疫組（40μg/100μl uPA+

2、等體積佐劑）和高劑量免疫組（80μg/100μl uPA+等體積佐劑）。每2周皮下多點(diǎn)注射免疫1次，于第3次免疫后1周取其尾動(dòng)脈血清以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)各組抗體效價(jià)，另外加設(shè)一組，即陰性對(duì)照組（PBS溶液代替樣本血清）便于ELISA法檢測(cè)中的比較。 結(jié)果:以ELISA法檢測(cè)各組血清樣本中抗人uPA多克隆抗體相對(duì)含量，uPA三個(gè)劑量免疫組與三個(gè)對(duì)照組（陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組和佐劑對(duì)照組）相比，抗人uPA多克隆抗體相

3、對(duì)含量是增高的，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；免疫組血清中抗人uPA多克隆抗體效價(jià)均達(dá)到1：10240以上。 結(jié)論:利用人源uPA分子作為抗原誘導(dǎo)雌性昆明小鼠產(chǎn)生抗人uPA抗體的免疫方法，不僅可以建立一種使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定uPA抗體的實(shí)驗(yàn)方法，而且小鼠體內(nèi)的抗體可以達(dá)到較高水平。 第二部分、抗人uPA抗體對(duì)雌性小鼠生殖能力的影響 實(shí)驗(yàn)一、誘導(dǎo)雌性小鼠產(chǎn)生抗人uPA抗體后對(duì)其交配和妊娠情況的影響 目的:采用人注射用u

4、PA免疫雌性小鼠，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗人uPA抗體后，觀察對(duì)雌性小鼠妊娠情況的影響。 方法:動(dòng)物分組及免疫方法同第一部分，于免疫4次后，分別將實(shí)驗(yàn)各組雌性小鼠與未經(jīng)任何處理的同周齡雄性小鼠進(jìn)行交配實(shí)驗(yàn)，于妊娠第7天解剖觀察并記錄妊娠率、平均胚胎著床數(shù)目。 結(jié)果:uPA低、中、高劑量免疫組雌性小鼠的妊娠率以及胚胎著床數(shù)目與空白和佐劑對(duì)照組相比，妊娠率及胚胎著床數(shù)目降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？瞻缀妥魟?duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、 結(jié)論:人注射用uPA免疫雌性小鼠，可干擾小鼠的生殖功能，使生育能力顯著下降，提示uPA可能成為免疫避孕的有效靶點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)二、誘導(dǎo)雌性小鼠產(chǎn)生抗人uPA抗體后對(duì)其體外受精能力的影響 目的:研究采用人注射用uPA免疫雌性小鼠，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗人uPA抗體后，對(duì)小鼠的卵細(xì)胞體外受精能力影響，探討uPA免疫使雌性小鼠生育力下降的機(jī)制。 方法:動(dòng)物分組及免疫方法同第一部分，于第12次免疫后1周，給予各實(shí)驗(yàn)組雌性小鼠P

6、MSG/hCG促排卵后，獲卵細(xì)胞團(tuán)，記錄卵細(xì)胞數(shù)目，與未經(jīng)任何處理的健康雄性小鼠精子進(jìn)行體外受精實(shí)驗(yàn)，記錄受精率。卵巢組織經(jīng)4％多聚甲醛固定，常規(guī)脫水、透明、包埋、切片、染色，記錄黃體數(shù)目。 結(jié)果: 1.排卵數(shù)目:uPA低、中、高劑量免疫組雌性小鼠排出的卵細(xì)胞數(shù)目分別與空白和佐劑對(duì)照組相比，明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；空白和佐劑差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.體外受精率:與空白對(duì)照組相比，佐劑對(duì)照組、低、中、高劑量免疫

7、組的受精率有所降低，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.卵裂情況:A+B級(jí)的卵裂的胚胎率在中、高劑量組占的比例明顯比空白對(duì)照組、佐劑對(duì)照組和低劑量組要低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。空白對(duì)照組、佐劑對(duì)照組及低劑量組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.平均黃體數(shù)目:卵巢組織切片中平均黃體數(shù)目分別與空白和佐劑對(duì)照組相比，uPA低、中、高劑量免疫組明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論:采用人注射用uPA免疫雌性小鼠，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗人uPA抗體

8、后，影響雌性小鼠卵泡排放、卵細(xì)胞受精能力，導(dǎo)致排卵數(shù)目、體外受精率和平均黃體數(shù)目下降，胚胎質(zhì)量下降。 實(shí)驗(yàn)三、體外實(shí)驗(yàn)觀察含抗人uPA抗體血清干預(yù)正常雌性小鼠卵細(xì)胞對(duì)其受精能力的影響 目的:觀察該含抗人uPA抗體血清對(duì)正常雌性小鼠卵細(xì)胞的受精能力和存活情況的影響，探討uPA免疫使雌性小鼠生育力下降的機(jī)制。 方法:經(jīng)過(guò)PMSG/hCG促排卵獲得健康雌性小鼠卵細(xì)胞團(tuán)，將該卵細(xì)胞團(tuán)與各實(shí)驗(yàn)組的小鼠血清共同孵育30min

9、后，再與未經(jīng)任何處理的健康雄性小鼠精子進(jìn)行體外受精實(shí)驗(yàn)，記錄受精率和卵細(xì)胞死亡率。 結(jié)果: 1.體外受精率:經(jīng)過(guò)與uPA低、中、高劑量免疫組的血清共同孵育的卵細(xì)胞受精率比空白對(duì)照和佐劑對(duì)照組降低，并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？瞻缀妥魟?duì)照組受精率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.卵細(xì)胞的死亡率:含抗人uPA抗體的血清干預(yù)正常小鼠卵細(xì)胞，不僅受精率下降，并且明顯的出現(xiàn)較多死亡的卵細(xì)胞，其中以高劑量免疫組卵細(xì)胞的死亡率為最高，