輔助生殖與小鼠生物凈化及雄性不育品系的挽救.pdf

1、輔助生殖技術(shù)是指采用輔助手段使不孕或不育動(dòng)物（包括人）成功妊娠產(chǎn)子的技術(shù)，臨床主要運(yùn)用于不孕不育的治療，動(dòng)物中主要用于生物凈化或生殖生物學(xué)研究。輔助生殖技術(shù)包括超排、人工受精、體外受精、胚胎移植等各類衍生技術(shù)。我們通過(guò)輔助生殖技術(shù)對(duì)非SPF小鼠進(jìn)行了生物凈化，并對(duì)某些雄性不育品系進(jìn)行挽救，本研究共分為兩個(gè)部分。
　　實(shí)驗(yàn)一：采用剖宮產(chǎn)取胎和輔助生殖技術(shù)對(duì)引進(jìn)小鼠進(jìn)行生物凈化。針對(duì)具有正常繁殖能力的小鼠品系，通過(guò)陰道栓的檢查和觸診確

2、定剖宮產(chǎn)取胎時(shí)間，采用子宮摘除取手術(shù)對(duì)小鼠進(jìn)行剖宮產(chǎn)取胎，取出仔鼠進(jìn)行代乳，觀察代乳情況及代乳仔鼠成活率；對(duì)于繁殖力較差或者喪失繁殖能力的品系，采取輔助生殖的方式，采集小鼠精子和卵子，在HTF液中受精，培養(yǎng)后3.5天移植到SPF級(jí)受體母鼠子宮內(nèi)，待產(chǎn)子。兩種方式凈化的小鼠斷奶后送檢，均達(dá)到SPF級(jí)。
　　實(shí)驗(yàn)二：將圓形精子細(xì)胞注射到哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞中可產(chǎn)生新的胚胎和子代。然而，現(xiàn)仍有一些技術(shù)困難存在，特別是圓形精子細(xì)胞的識(shí)別承擔(dān)著

3、ROSI的發(fā)展。我們的研究是利用相差顯微鏡（PCM）和流式細(xì)胞分選儀（FACS）從睪丸細(xì)胞中挑選出圓形精子，對(duì)三個(gè)品系的小鼠進(jìn)行ROSI。在所有的品系中受精率，胚胎的發(fā)育和子代的獲得均無(wú)顯著差異；PCM和流式細(xì)胞儀篩選出的圓形精子細(xì)胞均可有效地挽救不育品系pten KO小鼠。
　　我們研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)微生物級(jí)別達(dá)不到SPF級(jí)但不含垂直傳播病原體的小鼠，采用兩種方式均可有效提高小鼠的微生物等級(jí)。另外，ROSI實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)流式細(xì)胞儀