家蠶卵巢細(xì)胞系BmN-SWU1的建立及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、昆蟲(chóng)細(xì)胞系已經(jīng)成為生物學(xué)、生物技術(shù)、生物制藥以及生物殺蟲(chóng)劑等研究中的重要工具。家蠶作為一種模式昆蟲(chóng)，對(duì)家蠶細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，應(yīng)用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行理論研究和生產(chǎn)應(yīng)用，長(zhǎng)期以來(lái)倍受關(guān)注。雖然前人在這方面做了大量工作，但現(xiàn)有的家蠶細(xì)胞系數(shù)量仍然偏少，且應(yīng)用于生產(chǎn)的家蠶細(xì)胞系更少。家蠶基因組框架圖完成以后，家蠶功能基因組研究需要提供不同發(fā)育時(shí)期、不同分化程度、不同組織特異性的家蠶細(xì)胞系作為研究平臺(tái)。為了滿足家蠶細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和分子生物學(xué)，新

2、的桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)以及家蠶細(xì)胞工程等方面的研究需要，迫切需要建立和研究新的家蠶細(xì)胞系。 本研究在前人的研究基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)家蠶品種21-872n1w的卵巢組織進(jìn)行兩年多的原代培養(yǎng)，得到高繁殖率的細(xì)胞群體，經(jīng)過(guò)逐步分離純化，建立了家蠶卵巢細(xì)胞系BmN-SWU1。該細(xì)胞系的生物學(xué)特性如下： 1.該細(xì)胞系是以多邊形、圓形及短梭形細(xì)胞為主的貼壁上皮型細(xì)胞系，圓形細(xì)胞直徑為9～31μm，短梭形細(xì)胞的大小為19～52μm×5～21

3、μm。 2.BmN-SWU1細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，繁殖力強(qiáng)；細(xì)胞接種后，從72h到192h是BmN-SWU1細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在192h時(shí)細(xì)胞濃度達(dá)到頂峰，最終細(xì)胞鋪平率達(dá)80％以上；細(xì)胞群體倍增時(shí)間為57.74h。 3.BmN-SWU1細(xì)胞系的染色體具有鱗翅目昆蟲(chóng)染色體的典型特征，中期染色體呈短桿狀或顆粒狀，具彌散型著絲粒。二倍體細(xì)胞(2n=56)比例高達(dá)80.5％，屬二倍體細(xì)胞系，未見(jiàn)異常有絲分裂現(xiàn)象，較好地保持了家蠶卵巢

4、細(xì)胞的有絲分裂和染色體特征。 4.BmN-SWU1細(xì)胞在接種家蠶核型多角體病毒BmNPV48h后就可見(jiàn)到少量細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生了BmNPV病毒多角體，96h時(shí)可觀察到有50.29％的細(xì)胞內(nèi)有多角體產(chǎn)生；在120h時(shí)，感染率達(dá)83.01％；在144h時(shí)，有89.91％細(xì)胞產(chǎn)生多角體，并且大多數(shù)細(xì)胞已經(jīng)破裂。測(cè)得其TCID50值為1.626×10-6。同樣條件下，對(duì)照組細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞系BmN在接種BmNPV192h后均未發(fā)現(xiàn)BmNPV多角體

5、的產(chǎn)生。 5.經(jīng)考馬斯亮藍(lán)R-250染色法顯示，在梭形BmN-SWU1細(xì)胞中的微絲束是與細(xì)胞長(zhǎng)軸方向一致的纖維，有時(shí)在兩端彎曲成弧形?？v向的微絲束長(zhǎng)短不一，許多從細(xì)胞一端直達(dá)另一端，微絲束常出現(xiàn)分枝和合并，使得整個(gè)微絲系統(tǒng)連結(jié)成一個(gè)網(wǎng)格。圓形的BmN-SWU1細(xì)胞中的微絲束以細(xì)胞核為中心，向細(xì)胞膜方向呈輻射狀排列，微絲束也常出現(xiàn)分枝和合并，結(jié)成一個(gè)網(wǎng)格。這些微絲束構(gòu)成細(xì)胞形狀的基本輪廓。 綜上所述，經(jīng)兩年多的家蠶卵巢組織