PARP-1抑制劑PJ34聯(lián)合化療對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖及凋亡影響.pdf

1、目的：探討第三代選擇性PARP-1抑制劑PJ34單藥及聯(lián)合Cisplatin、Docetaxel對(duì)于NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、H460細(xì)胞增殖抑制及凋亡的影響,為PARP-1抑制劑PJ34臨床應(yīng)用用于肺癌提供一定的理論依據(jù),期望PARP抑制劑聯(lián)合化療治療肺癌的可能性,為非小細(xì)胞肺癌治療提供新的思路,以改善晚期NSCLC患者的預(yù)后。
　　方法：1.體外培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌A549、NCI-H460細(xì)胞系,用四甲基偶氮哇鹽(tetraz

2、olium-based eolorimetric assay,MTT)法檢測(cè)PARP-1抑制劑PJ34、Cisplatin、Docetaxel單藥及PJ34聯(lián)合Cisplatin、Docetaxel對(duì)NSCLCA549、NCI-H460細(xì)胞增殖情況的影響;2.Hoechst33342/PI熒光染色后熒光顯微鏡下觀察PJ34單藥及聯(lián)合給藥后細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變;3.流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期分析PJ34單藥及聯(lián)合作用后細(xì)胞周期的變化;4.流式細(xì)胞術(shù)

3、AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)PJ34單藥及聯(lián)合給藥后對(duì)細(xì)胞凋亡情況的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法示:與對(duì)照組相比,PJ34各濃度單獨(dú)處理A549、H460細(xì)胞后,細(xì)胞增殖明顯受到抑制,PJ34對(duì)NSCLC細(xì)胞A549、NCI-H460增殖抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴性關(guān)系。PJ34作用A549細(xì)胞24、48、72h的IC50分別為(16.42±1.49)、(9.36±1.18)、(6.86±0.87)μg/

4、ml,PJ34作用NCI-H460細(xì)胞的IC50分別為(13.67±1.94)、(8.33±1.16)、(5.38±0.43)μg/ml。
　　2.1/8,1/4,1/2,1,2倍IC50濃度的PJ34、Cisplatin聯(lián)合作用A549細(xì)胞72h后,細(xì)胞增殖抑制率:(13±1.12)、(31.25±2.4)、(55.32±4.32)、(83.31±5.23)、(93.78±2.8)％;作用H460細(xì)胞72h后細(xì)胞增殖抑制率:(1

5、6.1±1.83)、(30.31±2.87)、(49±5.54)、(64.26±6.22)、(84.21±3.32)%,通過(guò)Compusyn藥物劑量效應(yīng)分析軟件分析,PJ34聯(lián)合Cisplatin具有明顯的協(xié)同效應(yīng)(CI<1)。
　　3.1/8,1/4,1/2,1,2倍IC50濃度的PJ34、Doctaxel聯(lián)合作用A549細(xì)胞72h后,細(xì)胞增殖抑制率:(17.3±1.8)、(24.3±2.7)、(49.35±3.5)、(66.8

6、7±5.2)、(80.34±2.8)%,作用H460的細(xì)胞72h后,細(xì)胞增殖抑制率:(14.25±1.6)、(28.27±2.47)、(48.27±4.12)、(65.44±4.87)、(78.95±3.21)%,通過(guò)Compusyn軟件分析,發(fā)現(xiàn)PJ34聯(lián)合Docetaxel呈拮抗作用(CI>1)。
　　4.細(xì)胞周期分析顯示:PJ34作用A549、H460細(xì)胞72h后,細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,不同濃度組的G0/G1期細(xì)胞數(shù)量

7、明顯對(duì)于組照組,而處于S期的細(xì)胞則較對(duì)照組明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),G2/M期未見明顯變化。
　　5.流式細(xì)胞術(shù)凋亡檢測(cè)顯示,PJ34作用A549、H460細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡明顯增加,且PJ34與Cisplatin聯(lián)合后,聯(lián)合組凋亡細(xì)胞比例明顯高于單藥組細(xì)胞凋亡比例,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.在一定的濃度范圍內(nèi),PARP-1抑制劑PJ34對(duì)人NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、N