WRKYs參與H2S和H2O2介導(dǎo)的葡萄抗霜霉病過程.pdf

1、WRKYsinVolveintheprocessofH2SandH202一mediatedgrapereSiStancetodownymijIdewThesissubmittedtoQ叼缸D內(nèi)疵亂厲”紀(jì)fU記覘疵砂InFulfillmentoftheI沁quirementfOrtheDegreeOfMaSterOfSCienCeGuoXiuPing(DepartmentofLifeScience)SupeIVisor：ProLiuxin

2、刪a0Chi豫June，2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要WRKYs參與H2S和H202介導(dǎo)的葡萄抗霜霉病過程摘要由葡萄霜霉病菌(尸如s聊op口r口1l，誑cD融(BerkEtcu|啦s)BeretdeTom)引起的葡萄霜霉病(黟印edowny面ldew)是一種世界性的真菌病害，在葡萄的栽培和生長過程中很容易發(fā)生，嚴(yán)重地影響著葡萄的生長和果實(shí)的產(chǎn)量及品質(zhì)。本論文以左優(yōu)紅組培苗為材料，克隆了蜥≯礦賦3、踟翮ⅨⅣ5和踟瞅K”J三個(gè)轉(zhuǎn)錄因子

3、，并進(jìn)行表達(dá)特性分析和亞細(xì)胞定位；以對霜霉病具有不同抗性的2個(gè)葡萄品種左優(yōu)紅和霞多麗為材料，研究了葡萄應(yīng)答葡萄霜霉病菌過程H2S(hy出09ensulfide，H2S)和H202(hydrogenpe∞xide，H202)的變化及其來源；同時(shí)探討了葡萄Vv嗽Ys、H2S和H202在葡萄抵御霜霉病茵過程中的相互關(guān)系，為深入研究葡萄抗霜霉病機(jī)制提供理論依據(jù)以抗性品種左優(yōu)紅組培苗為材料，檢測霜霉病菌對所礬隧婚相對表達(dá)量的影響結(jié)果表明，接種霜霉

4、病菌后蜘形RKH3、跏阿似W5和踟職Ky7J均在6h相對表達(dá)量達(dá)到最大，表明Vvw鼬吖s參與葡萄應(yīng)答霜霉病的過程；利用同源克隆法克隆踟形肽W3、腳形膦W5和形豚”J，測序結(jié)果顯示：蜥膿KW3擴(kuò)增片段大小為681bp，編碼226個(gè)氨基酸；踟職K心5擴(kuò)增片段大小為549bp，可編碼183個(gè)氨基酸；蹄眥K】，7J擴(kuò)增片段大小為936bp，編碼311個(gè)氨基酸序列。與Genebank中提交的基因序列相比，蜥刪Ⅸn3、跏懈KW5和所膿Ky7j一致性

5、分別為為9985％、9964％和9968％對vvwRKYl3、vvwRKY45和VvwRKY71的生物信息學(xué)及表達(dá)特異性分析結(jié)果顯示，這三個(gè)蛋白均含有保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，且都在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)；分子量分別為2572、2079和3478kDa，p1分別為908、941和694；不穩(wěn)定系數(shù)分別為6087、4981和6046；均含有絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸磷酸化位點(diǎn)，在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著重要的作用；分析這三個(gè)wRKY氨基酸序列的親水性和疏水性發(fā)現(xiàn)

6、整個(gè)多肽均表現(xiàn)出一定的疏水／親水平衡，并且其二級結(jié)構(gòu)中含有無規(guī)則卷曲、片層結(jié)構(gòu)和螺旋結(jié)構(gòu)。低溫、水楊酸(salicylicacid，SA)、脫落酸(abscisicacid，ABA)、茉莉酸(iaSnl0砌lteacid，JA)、硝普鈉(sodiumni仃0pmsside，sNP)、鹽脅迫、滲透脅迫等均可誘導(dǎo)跏刪Ⅸ川3、跏∥脹W5和踟膿K”『的表達(dá)量的上升以對霜霉病具有不同抗性的左優(yōu)紅和霞多麗組培苗為材料，利用植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)手段，結(jié)合藥