Notch信號(hào)介導(dǎo)全反式維甲酸抑制大鼠后肢芽基質(zhì)細(xì)胞軟骨發(fā)育形成的作用.pdf

1、目的：
　　研究全反式維甲酸（ATRA）對(duì)大鼠后肢芽基質(zhì)細(xì)胞（rEHBMCs）的軟骨發(fā)育的抑制作用，并探討其相關(guān)的分子機(jī)制。
　　方法：
　　體內(nèi)試驗(yàn)：HE染色檢測(cè)ATRA對(duì)胎鼠后肢軟骨發(fā)育的作用，免疫組化檢測(cè)ATRA對(duì)胎鼠后肢軟骨細(xì)胞增殖與分化的作用，免疫熒光檢測(cè)ATRA對(duì)胎鼠后肢軟骨Notch1的作用。體外實(shí)驗(yàn)：CCK8和阿利新藍(lán)染色檢測(cè)ATRA對(duì)rEHBMCs的細(xì)胞增殖和聚集的作用，RT-PCR和Western-

2、blot檢測(cè)ATRA對(duì)軟骨特異性分子SOX9和COL2A1，以及Notch1、Hes-1基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　體內(nèi)試驗(yàn)：我們HE染色顯示：ATRA抑制大鼠后肢軟骨的增殖與分化，ATRA組中軟骨生長(zhǎng)板增殖區(qū)與肥大區(qū)明顯縮短。免疫組化檢測(cè)提示，ATRA組中軟骨生長(zhǎng)板增殖明顯減弱，SOX9表達(dá)減少。免疫熒光結(jié)果提示，ATRA組中軟骨生長(zhǎng)板Notch1表達(dá)明顯增強(qiáng)。體外實(shí)驗(yàn)： CCK8實(shí)驗(yàn)表明ATRA對(duì)rEHBMCs的增

3、殖具有劑量依賴性的抑制作用。阿利新藍(lán)染色表明，ATRA10-6mmol/L和ATRA10-5mmol/L顯著減少軟骨細(xì)胞的數(shù)量和面積（與對(duì)照組相比較，P<0.01）。我們的RT-PCR結(jié)果顯示，ATRA劑量依賴性地下調(diào)SOX9和COL2A1（與對(duì)照組相比，P<0.05或0.01）的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。同樣的，ATRA也呈劑量依賴性地下調(diào)SOX9和COL2A1的蛋白表達(dá)水平（與對(duì)照組相比，P<0.05或0.01）。此外，ATRA顯著升高No

4、tch1、Hes-1（與對(duì)照組相比，P<0.01）的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平,且具有劑量依賴性。為了進(jìn)一步研究ATRA抑制rEHBMCs軟骨發(fā)育的分子機(jī)制，我們使用了Notch信號(hào)阻斷劑-DAPT，結(jié)果顯示，相比于ATRA單獨(dú)誘導(dǎo)rEHBMCs，DAPT能拮抗ATRA,顯著增加SOX9和COL2A1表達(dá)（P<0.05），同時(shí)，微團(tuán)培養(yǎng)結(jié)果也提示相比于ATRA單獨(dú)誘導(dǎo)rEHBMCs，DAPT能拮抗ATRA,顯著增加軟骨結(jié)節(jié)。