TGF-β抑制自然殺傷細胞在細粒棘球蚴免疫逃逸作用中的初步探討.pdf

1、目的：
　　通過建立細粒棘球蚴感染小鼠動物模型，探討細粒棘球蚴是否通過促進脾細胞分泌抑制性分子TGF-β1而促使CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細胞分化，從而下調(diào)NK細胞活性受體NKG2D的表達，最終抑制NK細胞對原頭蚴的殺傷，而形成對宿主的免疫逃避。
　　方法：
　　1.建立小鼠細粒棘球蚴感染模型，實驗組用原頭蚴感染BALB/c小鼠，對照組小鼠腹腔注射同體積的PBS；分別于第1、3、5、7、9、12天處死后，用流式細胞儀檢測

2、脾細胞中T淋巴細胞亞群CD4+/CD8+T細胞比值及CD4+CD25+T細胞的含量及NK細胞的活性受體NKG2D的表達；qRT-PCR法檢測Foxp3 mRNA和TGF-β1 mRNA的相對表達量；Yac-1作為靶細胞與小鼠脾細胞共培養(yǎng)，用LDH法檢測小鼠NK細胞對Yac-1的裂解率，觀察脾細胞的殺傷活性。
　　2.建立小鼠細粒棘球蚴感染模型，并用抑制劑特異性阻斷TGF-β1受體，于第9天處死后用流式細胞儀檢測T淋巴細胞亞群CD4

3、+/CD8+T細胞比值及CD4+CD25+T細胞的含量及NK細胞的活性受體NKG2D的表達；用LDH法檢測脾細胞的殺傷活性；Western Bolting檢測細粒棘球蚴對TGF-β/Smad的信號通路的影響。
　　結(jié)果：
　　1.在細粒棘球蚴感染早期，CD4+CD25+Foxp3+T比值增高：與對照組相比小鼠CD4+/CD8+T細胞比值逐漸下降；隨著感染時間的延長，CD4+CD25+T細胞數(shù)量呈逐漸增高；Foxp3在基因水平

4、上的表達呈增高的趨勢；與對照組相比，除感染后第1天無統(tǒng)計學(xué)差異外，其他的均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　2.在細粒棘球蚴感染早期，外周血中TGF-β1的含量增高：ELISA結(jié)果顯示外周血細胞因子TGF-β1水平顯著高于對照組（P<0.05），并隨著感染時間的延長而增高；qRT-PCR法檢測到TGF-β1在mRNA水平的表達量也高于對照組（P<0.05），隨著感染時間的延長，呈增高的趨勢。
　　3.在細粒棘球蚴感染早期，

5、小鼠NK細胞數(shù)量及殺傷活性均下降：小鼠NK細胞對Yac-1細胞的裂解率與對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；隨著時間的延長NK細胞的活性受體NKG2D的表達量呈下降的趨勢，與對照組比較，感染后1、3、9、12天NKG2D的表達量都有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。隨著時間的延長NK細胞數(shù)量呈下降的趨勢，與感染前比較，感染后第1、3、9、12天NK數(shù)量差異都有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。細粒棘球蚴早期，感染小鼠NK細胞的殺傷活性與其活性

6、受體 NKG2D的表達呈正相關(guān)，R2=0.679。
　　4.細粒棘球蚴早期感染小鼠，通過抑制劑SB-525334阻斷TGF-β1受體后，上述所有結(jié)果均逆轉(zhuǎn)：其下游分子Smad2/3磷酸化蛋白表達下降，NK細胞活性受體NKG2D表達增加，NK細胞對靶細胞的裂解率恢復(fù)，小鼠NK細胞的活性與其活性受體NKG2D的相關(guān)性分析的表達呈正相關(guān)，CD4+/CD8+T細胞比值升高，CD4+CD25+T細胞數(shù)量減少。
　　結(jié)論：
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