核酸適配體AS1411對腫瘤細(xì)胞輻射敏感性影響研究.pdf

1、目的:本課題以HeLa細(xì)胞為研究對象,研究探討AS1411對人宮頸癌細(xì)胞HeLa的輻射敏感性的影響,通過檢測不同濃度AS1411預(yù)處理聯(lián)合X射線照射條件下HeLa細(xì)胞的存活率,以及觀察AS1411預(yù)處理聯(lián)合X射線對HeLa細(xì)胞DNA損傷修復(fù)、周期分布和凋亡的影響,研究AS1411對HeLa細(xì)胞輻射敏感性影響的作用機(jī)理。
　　方法:采用CCK-8法測定細(xì)胞活性,研究AS1411對HeLa細(xì)胞增殖-毒性的影響;克隆形成法觀測不同濃度A

2、S1411預(yù)處理聯(lián)合X射線照射對HeLa細(xì)胞存活率的影響;采用抗γ-H2AX抗體標(biāo)記法來檢測DNA雙鏈斷裂,研究AS1411對X射線導(dǎo)致的HeLa細(xì)胞DNA雙鏈斷裂的影響;利用流式細(xì)胞術(shù)測定AS1411預(yù)處理聯(lián)合X射線照射對HeLa細(xì)胞周期分布、細(xì)胞阻滯和細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果:
　　(1) CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:不同濃度AS1411處理HeLa細(xì)胞24h、48h、72h, HeLa細(xì)胞存活率均大于94％,表明AS14

3、11的細(xì)胞毒性小?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)顯示:不同濃度AS1411預(yù)處理的HeLa細(xì)胞X射線照射后細(xì)胞存活率具有顯著性差異(P<0.05)。從吸收劑量-細(xì)胞存活曲線可以得出:低劑量區(qū)“肩區(qū)”同樣明顯縮小變窄,直線斜率部分增大,且各劑量點(diǎn)的存活率均低于對照組,這表明AS1411對HeLa細(xì)胞具有明顯的輻射增敏作用。
　　(2) DNA損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到:經(jīng)AS1411預(yù)處理的HeLa細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi)DNA斷裂數(shù)明顯增多。經(jīng)AS1411處理HeLa細(xì)

4、胞24h,細(xì)胞核內(nèi)DNA斷裂數(shù)明顯多于對照組;照射劑量為4Gy、8Gy時(shí),加藥+照射組核內(nèi)DNA斷裂數(shù)明顯多于單純照射組,其濃度為1μmol/L照射劑量為4Gy、8Gy時(shí)細(xì)胞核內(nèi)DNA斷裂數(shù)分別是21.024±2.25和61.052±2.68,而單純照射組核內(nèi)DNA斷裂數(shù)分別是9.681±2.13和20.789±2.73。
　　(3)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出:經(jīng)不同濃度AS1411處理HeLa細(xì)胞后,細(xì)胞周期(G0/G1期、S期、G2

5、/M期)分布與對照組相比S期細(xì)胞增加;8GyX射線照射經(jīng)不同濃度AS1411預(yù)處理HeLa細(xì)胞出現(xiàn)G2/M期阻滯,但AS1411預(yù)處理并不影響輻射引起的G2/M期阻滯,這表明AS1411增加HeLa細(xì)胞的輻射敏感性的機(jī)制與細(xì)胞周期無關(guān)。
　　(4)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:AS1411可以促進(jìn)輻射誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞的凋亡。經(jīng)AS1411預(yù)處理,500nmol/L組和1μmol/L組細(xì)胞早期凋亡率分別是7.71±1.51％、8.91±1

6、.04％,對照組細(xì)胞早期凋亡率是5.86±0.81％;照射劑量為4Gy、8Gy時(shí),加藥+照射組細(xì)胞凋亡率高于單純照射組,照射劑量為4Gy時(shí)500nmol/L組和1μmol/L組的細(xì)胞早期凋亡率分別是19.67±1.90％和21.31±1.74％,單純照射組細(xì)胞早期凋亡率是15.44±2.41％;照射劑量為8Gy時(shí)500nmol/L組和1μmol/L組的細(xì)胞早期凋亡率分別是39.02±1.91％和41.99±0.65％,單純照射組細(xì)胞早期

7、凋亡率是35.90±2.92％。
　　結(jié)論:
　　(1) AS1411對HeLa細(xì)胞沒有顯現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)結(jié)果表明AS1411對HeLa細(xì)胞具有明顯的輻射增敏作用。
　　(2) AS1411可以阻止輻射誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞DNA損傷的修復(fù),這表明AS1411提高HeLa細(xì)胞的輻射增敏作用與其阻止細(xì)胞DNA損傷修復(fù)的作用有關(guān)。
　　(3) AS1411增加HeLa細(xì)胞的輻射敏感性的機(jī)制與細(xì)胞周期無關(guān)。<