P2X7-P2X4受體對(duì)大鼠缺氧缺糖損傷海馬腦片IL-1合成和釋放的介導(dǎo)作用.pdf

1、【目的】觀察嘌呤能P2X7/P2X4受體對(duì)大鼠缺氧缺糖損傷海馬腦片中IL-1α、IL-1β及IL-18合成和釋放的調(diào)節(jié)作用。
　　 【方法】雄性SD大鼠體重150-200g，斷頸處死后分離海馬，0℃制備400μm海馬腦片，隨后應(yīng)用95％O2/5%C02飽和的aCSF于35℃恒溫孵育30min使其恢復(fù)活性。腦片隨機(jī)分為四組：1）空白對(duì)照組(C組)，繼續(xù)應(yīng)用95%O2/5%CO2飽和aCSF孵育不同時(shí)間；2）OGD組（0組），將孵育

2、后的腦片移至95%N2/5%C02飽和的無糖aCSF中，并置于持續(xù)充以95%N2/5%CO2(0.6ml/min)的容器內(nèi)進(jìn)行缺氧缺糖處理(oxygen/glucose deprivationOGD);3)OGD+BBG.組(OB組)，將孵育后的腦片移至加入P2X7受體特異性拮抗劑BBG(終濃度luM)的95%02/5%C02飽和的aCSF中孵育20分鐘，再進(jìn)行同O組相同的缺氧缺糖處理（無糖aCSF中加入相同濃度的BBG）；4）OGD+

3、anti-P2X4組（OP組），將孵育后的腦片移至加入P2X4受體抗體(終濃度1.5ug/ml)的95%O2/5%C02飽和的aCSF中孵育60分鐘，再進(jìn)行同0組相同的缺氧缺糖處理（無糖aCSF中加入相同濃度的P2X4受體的抗體）。各組在缺氧前和缺氧后20min、40min和60min檢測(cè)腦片孵育液中的乳酸脫氫酶(LDH)、IL-1α、IL-1β及IL-18的含量，HE染色觀察腦片組織病理形態(tài)學(xué)變化和Western blot檢測(cè)腦片細(xì)胞

4、內(nèi)IL-1β及IL-18前體蛋白含量。所有計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)表示，組內(nèi)不同時(shí)點(diǎn)間的比較應(yīng)用雙因素方差分析，組間同一時(shí)點(diǎn)的比較采用單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 【結(jié)果】與OGD前比較，0、OB、OP組缺氧缺糖后各時(shí)點(diǎn)所有指標(biāo)均有顯著性增高(P＜0.05)。1)O組LDH釋放量同C組比較顯著增高(P＜0.05)，且隨缺氧缺糖時(shí)間延長(zhǎng)而進(jìn)行性升高；OB組缺氧缺糖40min和6

5、0min時(shí)點(diǎn)LDH釋放量較O組顯著降低（P＜0.05），而OP組缺氧缺糖各時(shí)點(diǎn)LDH釋放量與O組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2）HE染色顯示，BBG可減輕腦組織損傷，而P2X4抗體無影響。3）與缺氧缺糖前相比，IL-1a和IL-1β在0組的釋放顯著升高(P＜0.05)，OGD后20min達(dá)到高峰并維持在高水平；而IL-18在缺氧缺糖后釋放逐漸升高，與OGD前比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，在OGD后60min釋放達(dá)到高峰，明顯高于OGD后20min

6、和40min(P＜0.05)。與C組相比，IL-1a、IL-1β和IL-18在O組各時(shí)間點(diǎn)的釋放均顯著升高(P＜0.05)；與O組相比，OB組IL-1a和IL-1β釋放明顯減少（P＜0.05），但I(xiàn)L-18無明顯變化，OP組的上述指標(biāo)與O組也無明顯差異。4）各組在缺氧缺糖后細(xì)胞內(nèi)IL-1β前體蛋白和IL-18前體蛋白都明顯積聚，與C組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。與O組相比，OB組IL-1β前體蛋白積聚進(jìn)一步增加（P＜0.05）但I(xiàn)L