基于P2X1、P2X3受體探討加味五苓散對糖尿病膀胱功能障礙大鼠的作用機(jī)制.pdf

1、糖尿病膀胱功能障礙(DBD)是糖尿病慢性高血糖的一個(gè)并發(fā)癥。在糖尿病發(fā)展的過程中，部分患者逐漸出現(xiàn)排尿間隔延長、排尿感覺遲緩、排尿乏力、點(diǎn)滴而下與排尿不凈。尿動力學(xué)檢測提示有膀胱感覺受損、膀胱容量增加、逼尿肌收縮能力下降、殘余尿量增多等特點(diǎn)。由于膀胱的生理活動受周圍神經(jīng)所支配，因此多年來研究糖尿病膀胱病的發(fā)病機(jī)制主要針對于神經(jīng)源性病變。可是，在臨床上也能觀察到患病不久的糖尿病患者出現(xiàn)下泌尿系的癥狀，表現(xiàn)卻為尿急、尿頻、夜尿與急迫性尿失禁

2、，而且尿動力學(xué)檢測也提示不同程度的逼尿肌不穩(wěn)定或逼尿肌反射亢進(jìn)。這兩種系列相反的癥狀體征被認(rèn)為與疾病的時(shí)間推演有聯(lián)系，是糖尿病高血糖引起膀胱經(jīng)歷兩個(gè)階段、兩種病理變化的具體體現(xiàn)，即從早期膀胱過度活躍(OAB)的代償期階段到晚期膀胱失張力(UAB)的失代償期階段。而且，研究也發(fā)現(xiàn)膀胱的上皮細(xì)胞、神經(jīng)元、逼尿肌與尿道任何一方面出現(xiàn)異常都可以引起膀胱發(fā)生儲尿或排尿的功能障礙。
　　目的：以DBD大鼠模型探討加味五苓散對大鼠膀胱P2X1與

3、P2X3受體表達(dá)的作用機(jī)制。
　　方法：110只SPF級雄性SD大鼠經(jīng)普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，進(jìn)行隨機(jī)分組。正常組10只，其余納入造模組，包括模型組、托特羅定組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組。其后，造模組大鼠改以高脂飼料喂養(yǎng)1個(gè)月后，按45mg/kg劑量腹腔內(nèi)注射1％STZ。72hr后消毒剪尾取尾靜脈血，檢測血糖≥16.67mmol/L，并且伴見多飲、多食、多尿等情況，即考慮為糖尿病大鼠模型。每2周觀察體重與血糖的變

4、化，并且每4周以代謝籠收集大鼠的飲水量與排尿量。造模后第9周開始，對托特羅定組大鼠灌服2ml托特羅定，對中藥高、中、低劑量組分別灌服加味五苓散水煎劑6ml、3ml、1.5ml。第12周所有大鼠腹腔注射25％烏拉坦以麻醉，剖腹暴露膀胱并且在膀胱頂部造瘺，以30ml/h速率灌注生理鹽水，以檢測糖尿病大鼠的尿動力學(xué)變化。其后，分離膀胱測量濕重。經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋和切片，膀胱組織在HE染色后用光鏡觀察組織病理情況。最后，以免疫印跡、免疫細(xì)胞組

5、化技術(shù)對嘌呤受體P2X1、P2X3的表達(dá)進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：造模組大鼠出現(xiàn)高血糖的成模率為94.74％。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)共有44只大鼠完成實(shí)驗(yàn)，占總體的40％。其中正常組10只，造模組34只（包括模型組7只，托特羅定組6只，中藥高劑量組6只，中藥中劑量組7只，中藥高劑量組8只）。實(shí)驗(yàn)期間，正常組大鼠的整體情況良好，而造模組大鼠表現(xiàn)精神緊張，毛發(fā)稀疏枯黃。其余各項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果如下:①體重:組間對比發(fā)現(xiàn)中藥低劑量組大鼠比托特羅定組大鼠要重

6、，但與其它組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。組內(nèi)比較則發(fā)現(xiàn)只有模型組大鼠體重下降(p-0.009)，其它組則沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)變化。②血糖:組間對比發(fā)現(xiàn)中藥低劑量組大鼠血糖較模型組大鼠的低。但是，組內(nèi)比較則沒有發(fā)現(xiàn)藥物干預(yù)后各組的血糖有統(tǒng)計(jì)學(xué)變化。③飲水量:組間比較發(fā)現(xiàn)托特羅定組、中藥中劑量組、中藥低劑量組的飲水量較模型組為低。組內(nèi)比較則只有托特羅定組大鼠的飲水量下降(p=0.018)。④排尿量:組間比較并沒有發(fā)現(xiàn)造模組大鼠的排尿量有差異，但是組內(nèi)比較則發(fā)現(xiàn)只

7、有模型組與托特羅定組大鼠的排尿量有減少(p--0.006與p=0.002)。⑤尿動力學(xué):除中藥高劑量組外，其余造模組大鼠的排尿時(shí)間較正常組大鼠為延長。模型組與托特羅定組大鼠的最大膀胱排尿壓均較正常組大鼠的為低，以托特羅定組的差異較為顯著(p＜0.005)，但中藥組各組大鼠與正常組和模型組大鼠并沒有差異。除中藥高劑量組外，其余造模組大鼠的膀胱順應(yīng)性較正常組大鼠的為高，以托特羅定組大鼠的差異最為顯著(p＜0.005)。造模組大鼠之間并沒有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)差異。⑥膀胱濕重與膀胱濕重指數(shù):造模組各組大鼠的膀胱濕重較正常組為重，其中以模型組、中藥高劑量組與中藥中劑量組的差異較為顯著(p＜0.005);中藥中劑量組的膀胱濕重最重，而托特羅定組最輕，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而膀胱濕重指數(shù)方面，造模組大鼠均比正常組大鼠為高。⑦病理檢測:光鏡觀察HE染色切片，發(fā)現(xiàn)造模組大鼠的膀胱逼尿肌層有增厚現(xiàn)象，肌細(xì)胞肥大，形態(tài)多樣，肌束排列紊亂有斷裂，結(jié)構(gòu)松散，肌束間間隙明顯增寬，膠原纖維減少。⑧免疫印跡:各組的

9、P2X1、P2X3受體表達(dá)未見明顯異常，但是發(fā)現(xiàn)模型組的P2X3比值下降，托特羅定組與中藥低劑量組又下調(diào)，而中藥中劑量組與高劑量組則上調(diào)。⑨免疫組化:P2X1受體主要表達(dá)在逼尿肌、上皮細(xì)胞和血管壁;P2X3受體表達(dá)在逼尿肌。
　　結(jié)論：⑴本研究成功建立DBD大鼠模型。⑵未發(fā)現(xiàn)加味五苓散能降低DBD大鼠的體重、血糖、飲水量與排尿量。⑶未發(fā)現(xiàn)加味五苓散能改善第12周DBD大鼠的尿動力學(xué)排尿時(shí)間、最大膀胱排尿壓與膀胱順應(yīng)性。⑷未發(fā)現(xiàn)加味