P2X3受體胞內(nèi)相互作用分子的篩選、鑒定及其功能研究.pdf

1、P2X3受體屬于配體門控的離子通道，其N端和C端在細胞內(nèi)，有兩個跨膜結(jié)構(gòu)域和一個大的胞外環(huán)。P2X3受體受細胞外ATP激活，能夠非選擇性地通透鈉離子、鉀離子、鈣離子等低價陽離子。P2X3受體主要表達在皮膚、關(guān)節(jié)、空腔臟器等組織或器官的初級傳入神經(jīng)元，介導(dǎo)痛覺傳導(dǎo)、味覺傳導(dǎo)、胃腸蠕動、膀胱反射等多個生理過程，因此對P2X3受體調(diào)節(jié)的研究具有非常重要的意義。目前針對P2X3受體的相關(guān)工作主要集中在以其細胞外調(diào)節(jié)為核心的藥理學(xué)性質(zhì)方面的研究，

2、也有不少工作揭示了P2X3受體與細胞膜上其他分子的相互作用，然而對于其在細胞內(nèi)的調(diào)節(jié)和相互作用，仍知之甚少。
　　 本研究通過酵母雙雜交實驗，以P2X3受體C端胞內(nèi)域為誘餌蛋白，從人胚腦cDNA文庫中篩得6個新的與P2X3受體有潛在相互作用的分子，其中之一為肝細胞生長因子調(diào)節(jié)的酪氨酸激酶底物(HGS)。HGS分子最初于1995年被克隆出來。其分子量大小為115KDa，含有數(shù)個功能性結(jié)構(gòu)域，錨定于胞內(nèi)體膜上，參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、泛

3、素依賴的蛋白降解與膜蛋白再循環(huán)等過程。HGS分子在哺乳動物腦內(nèi)有高水平蛋白表達，并參與調(diào)節(jié)鈣離子依賴的突觸小泡的胞吐過程。但對于它在DRG中的表達與功能目前尚無報道。我們以HGS為對象，進行了進一步的鑒定和功能研究。
　　 我們的工作在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上，通過免疫共沉淀實驗證實，HGS分子可以與P2X3受體發(fā)生結(jié)合。而免疫組化實驗表明HGS分子與P2X3受體在大鼠DRG神經(jīng)元中有良好的共定位。在共轉(zhuǎn)HGS分子和P2X3受體的HE