紅樹林耐酸真菌Penicillium camemberti OUCMDZ-1492抗H1N1活性產(chǎn)物研究.pdf

1、耐酸微生物是一類極其重要的特境微生物，具有與普通微生物相比不同的遺傳背景和代謝途徑，能夠產(chǎn)生多種獨特的生物活性物質(zhì)，存在著多方面的潛在利用價值。紅樹林是一種陸海交界的典型生態(tài)系統(tǒng)，其土壤呈酸性，存在豐富的微生物資源，其中的耐酸真菌由于所處的生活環(huán)境特殊，其遺傳及生理特性與其它環(huán)境中的微生物有很大不同,能產(chǎn)生獨特的次生代謝產(chǎn)物，具有很大成藥潛力。對于紅樹林酸性（pH5）土壤中微生物次生代謝產(chǎn)物的研究鮮有報道，該項研究工作前景誘人。

2、　　為了研究耐酸菌株中結(jié)構(gòu)新穎，具有抗病毒活性的次生代謝產(chǎn)物，我們采用化學(xué)和活性相結(jié)合的集成篩選法，開展了對紅樹林酸性土壤次生代謝產(chǎn)物的研究工作。內(nèi)容包括：耐酸菌株的分離與純化；耐酸菌株的篩選及“天才”菌株的獲得；目標(biāo)菌株的發(fā)酵條件摸索；菌株發(fā)酵及化合物分離；單體化合物結(jié)構(gòu)鑒定及生合成途徑的推測；化合物活性初步評價及構(gòu)效關(guān)系的推測。
　　本文對中國海南省文昌紅樹林共31個根泥樣品進行了微生物的分離純化得到205株耐酸菌株，通過運用

3、TLC、HPLC指紋圖譜化學(xué)篩選模型以及抗甲型流感病毒H1N1生物活性篩選模型，最終篩選得到1株耐酸天才真菌（Talented Strains），對其次生代謝產(chǎn)物進行了深入研究。
　　在考察了不同發(fā)酵條件對這株菌的次生代謝產(chǎn)物的影響，包括培養(yǎng)方式，酸度，培養(yǎng)基等，確定了最佳的發(fā)酵條件。因在同一酸度（pH5）、兩種培養(yǎng)基中菌株代謝情況有較大差異，該論文在這兩種條件下對菌株P(guān)enicillium camemberti OUCMDZ-1

4、492進行了兩次不同規(guī)模的發(fā)酵培養(yǎng)，后用乙酸乙酯對發(fā)酵液進行萃取，獲得發(fā)酵提取物。綜合采用硅膠柱色譜、薄層色譜、凝膠柱色譜和半制備高效液相等多種色譜方法對耐酸天才真菌Penicillium camemberti OUCMDZ-1492的次生代謝產(chǎn)物進行化學(xué)分離獲得17個單體化合物（化合物結(jié)構(gòu)及名稱參見Fig.1）。利用NMR(核磁共振譜)、MS（質(zhì)譜）、UV(紫外光譜)、IR(紅外光譜)、CD(圓二色譜)等現(xiàn)代波譜學(xué)方法以及 X-射線單

5、晶衍射、化學(xué)反應(yīng)等方法確定了該17個化合物的結(jié)構(gòu)，其中8個新化合物。吲哚二萜類化合物11個（1-11）、5個α-吡喃酮類（12-16）和1個酰胺類化合物。
　　運用體外及體內(nèi)生物活性篩選模型，采用MTT法、SRB法等方法評價所獲得的單體化合物的抗腫瘤活性和抗流感病毒H1N1活性；采用瓊脂稀釋法評價化合物對致病菌的抑菌活性。結(jié)果表明：化合物1-3和5-10對H1N1病毒有顯著的抑制活性，IC50分別為28.3，38.9，32.2，7

6、3.3，34.1，26.2，6.6，77.9和17.7μM，其活性超過陽性對照利巴韋林。
　　綜上，本文對一株耐酸真菌的次生代謝產(chǎn)物進行了系統(tǒng)研究，共分離鑒定了17個化合物，包括6個新的吲哚二萜類化合物，1個新的α-吡喃酮類化合物和1個新的酰胺類化合物,其中化合物1-3、5-10表現(xiàn)出顯著的抗H1N1流感活性。這些研究發(fā)現(xiàn)低pH條件下更利于菌株OUCMDZ-1492產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物,增加其化學(xué)多樣性,進一步證實了菌株次生代謝