電針預(yù)處理對(duì)實(shí)驗(yàn)性癲癎大鼠認(rèn)知損害的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、癲癎發(fā)作既可引起腦的結(jié)構(gòu)損害，也可造成認(rèn)知及神經(jīng)心理上的損害。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床影像學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，癲癎的發(fā)作可以引起神經(jīng)元的死亡。在這種病理改變的基礎(chǔ)上，經(jīng)常遭受癲癎發(fā)作的患者可出現(xiàn)認(rèn)知功能損傷，包括反應(yīng)遲鈍、記憶困難、注意力缺陷等。在兒童癲癎患者，認(rèn)知損害更加廣泛，如：語言障礙、學(xué)習(xí)困難、學(xué)習(xí)成績(jī)差、行為障礙、并最終導(dǎo)致職業(yè)技能的降低。然而，目前對(duì)癲癎造成的認(rèn)知損害，仍然缺少理想的治療方法。
　　在祖國(guó)醫(yī)學(xué)，針灸是一種千百年來用于治療

2、多種疾病的臨床手段。它具有促進(jìn)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、改善腦血液循環(huán)、控制疼痛、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、以及抗癲癎作用。以往的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：不論是在紅藻氨酸，還是青霉素誘發(fā)的癲癎模型，電針（electro-acupunture，EA）均具有抗癲癎作用，EA穴位刺激可以改善匹羅卡品癲癎模型造成的大鼠認(rèn)知損害。在對(duì)癲癎發(fā)作后神經(jīng)元死亡的研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)凋亡的分子機(jī)制被激活。我們以往的研究表明，EA刺激百會(huì)和大椎穴可以抑制實(shí)驗(yàn)性癲癎大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。因此，我

3、們推測(cè)，EA的預(yù)處理可以預(yù)防癲癎發(fā)作引起的認(rèn)知缺損，其抑制神經(jīng)元凋亡的作用參與了這一過程。
　　癲癎后神經(jīng)元的凋亡受一系列凋亡調(diào)節(jié)因子的調(diào)控。半胱天冬酶（aspartate-specificcysteineprotease，Caspase）是一種天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白酶，在細(xì)胞內(nèi)以酶原的形式存在，在蛋白水解時(shí)激活為有活性的酶。半胱天冬酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)可激活凋亡的執(zhí)行分子（Caspase-3），從而裂解細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白、存活蛋白，激

4、活與DNA斷裂有關(guān)的酶。Bcl-2蛋白家族也參與了癲癎后神經(jīng)元死亡的調(diào)節(jié)，包括抗凋亡和促凋亡兩個(gè)方面。Bcl-2蛋白家族通過二聚體的形成在調(diào)節(jié)線粒體及其它細(xì)胞器的功能方面起著重要作用。
　　在本研究中，我們運(yùn)用水迷宮實(shí)驗(yàn)來觀察S-D大鼠的空間分辨能力及EA的保護(hù)作用，運(yùn)用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabelin

5、g，TUNEL）和4，6-二咪基-2-聯(lián)苯基吲哚（4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）染色觀察了鋰-匹羅卡品癲癎持續(xù)狀態(tài)（statusepilepticus，SE）模型大鼠的海馬神經(jīng)元凋亡，應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)海馬區(qū)Caspase及Bcl-2家族相關(guān)蛋白的表達(dá)。為EA預(yù)處理通過抑制海馬神經(jīng)元凋亡，進(jìn)而減輕癲癎對(duì)大鼠認(rèn)知的損害提供了證據(jù)。
　　本研究表明：
　　1）SE誘發(fā)了S-D大鼠海馬CA1/

6、CA3區(qū)大量的神經(jīng)元凋亡，進(jìn)而造成了認(rèn)知功能的損害（P<0.01，n=5）。
　　2）EA百會(huì)及大椎穴預(yù)處理減少了海馬CA1/CA3區(qū)的神經(jīng)元的凋亡（P<0.05，n=5），減低了SE誘發(fā)的認(rèn)識(shí)損害的程度（P<0.05，n=5）。
　　3）EA百會(huì)及大椎穴預(yù)處理抑制了海馬CA1/CA3區(qū)SE誘發(fā)的Bcl-2蛋白家族促凋亡因子Bim、Bid和Bax的表達(dá)增高（P<0.05，n=5）。
　　4）癲癎發(fā)作后海馬區(qū)的抗凋亡因子

7、Bcl-w和Bcl-2陽性的神經(jīng)元明顯增多（P<0.01，n=5），而EA百會(huì)及大椎穴預(yù)處理對(duì)其表達(dá)無明顯影響（P≧0.05，n=5）。
　　5）EA阿是穴預(yù)刺激對(duì)SE誘發(fā)的神經(jīng)元凋亡、認(rèn)知損害的程度、及Bcl-2蛋白家族凋亡調(diào)節(jié)因子的表達(dá)無明顯影響（P≧0.05，n=5）。
　　總而言之，本研究首次證明EA百會(huì)及大椎穴預(yù)處理，具有保護(hù)實(shí)驗(yàn)性癲癎大鼠海馬神經(jīng)元的作用，進(jìn)而減低癲癎發(fā)作對(duì)認(rèn)知的損害。其機(jī)制可能與其抑制促凋亡因子