乙型肝炎病毒基因分型芯片特異核酸片段的制備.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文乙型肝炎病毒基因分型芯片特異核酸片段的制備姓名：徐曉雪申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙雨杰20090401更為牢固、穩(wěn)定，其信號強(qiáng)度更佳。通過本研究初步證明實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，為構(gòu)建HBV基因亞型全分型芯片及其臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法一、實(shí)驗(yàn)材料C型HBV病毒樣本為本實(shí)驗(yàn)室保存；感受態(tài)JMl09菌，pMD18T質(zhì)粒，rTaq酶，pyrobest酶限制性內(nèi)切酶EcoRI、NcoI，VentR一

2、(exo一)DNA聚合酶質(zhì)粒提取試劑盒、PCR產(chǎn)：物切膠回收試劑盒PCR擴(kuò)增儀(BiometraPersonalPCRsystem，Germany)生物芯片點(diǎn)樣儀(MicroGrindII600，BiorobticsLtd，England)激光共聚焦掃描儀(GeneTAC刑LSIV，GenomicSolutionsIncUSA)空氣變溫PCR擴(kuò)增儀和原位延伸基因芯片盒(實(shí)驗(yàn)室自制)二、實(shí)驗(yàn)方法1在NCBI數(shù)據(jù)庫中收集AH八種基因型HBV

3、的全基因組序列。利用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行分析比對。篩選出分型位點(diǎn)。2根據(jù)選擇的位點(diǎn)設(shè)計(jì)探針及引物，并且分析其特異性。3通過SOEing法制備包含分型堿基位點(diǎn)的特異核酸片段并測序。4利用不具有3’5’外切酶活性的ventR一(exo一)DNA聚合酶通過常規(guī)PCR對制備出的特異核酸片段進(jìn)行驗(yàn)證。5席0備基因芯片：處理片基，按預(yù)先設(shè)計(jì)好的微陣列點(diǎn)陣使用生物芯片點(diǎn)樣儀將探針點(diǎn)到芯片上，水化，烘烤固定并且與基因芯片盒組裝備用。6以制備出的特異核酸片