大鼠脊髓圓錐損傷后排便功能重建的初步實驗研究.pdf

1、目的：在對大鼠排便的初級運動、感覺中樞定位的基礎(chǔ)上，應(yīng)用神經(jīng)移位修復(fù)重建直腸與肛管的運動、感覺神經(jīng)通路，建立大鼠脊髓圓錐損傷后直腸-肛管生理反射弧重建排便功能動物模型，并觀測該生理反射通路重建排便功能的修復(fù)效果，從而為臨床脊髓損傷（spinal cord injury, SCI）患者神經(jīng)性大腸（neuropathic bowel）功能重建提供新的修復(fù)思路。
　　方法：①大鼠脊髓圓錐損傷后排便生理反射弧重建排便功能動物模型的建立：先

2、建立大鼠脊髓圓錐損傷動物模型，再建立真正生理意義上的人工排便反射通路；選取20只體重280~300g的成年雌性SD大鼠，隨機分為2組，每組10只。先對A組、B組動物做L2~S4平面椎板切開，在硬膜外用顯微剪刀切斷脊髓L6/S1平面，造成SD大鼠的橫斷性脊髓損傷，在此基礎(chǔ)上A組為右側(cè)L6前、后根分別與右側(cè)S2前、后根端端吻合造模；B組為右側(cè)L6總干與右側(cè)S2總干端端吻合。左側(cè)不做任何處理。術(shù)后觀察大鼠排便情況及下肢活動情況，并行BBB評分

3、。術(shù)后8周取材并對感覺、運動神經(jīng)行甲苯胺藍染色，計算感覺、運動神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維通過率，并進行電生理檢查。②大鼠脊髓圓錐損傷后排便功能重建的初步觀察：取60只體重280~300g的成年雌性SD大鼠，隨機分為5組，每組12只。均予以右側(cè)L6前、后根分別與右側(cè)S2前、后根端端吻合神經(jīng)移位法成功建立大鼠脊髓圓錐損傷后直腸-肛管生理反射弧重建排便功能動物模型，分別于術(shù)后2W、4W、8W、12W、20W通過一般行為學(xué)觀察，電生理檢測，吻合口神經(jīng)纖維

4、的形態(tài)學(xué)觀察，凋亡相關(guān)基因檢測等，最后根據(jù)各項測量指標，分別統(tǒng)計各組標本所測得的數(shù)據(jù)，應(yīng)用SPSS13.0軟件計算平均值和標準差，分析數(shù)據(jù)，結(jié)果采用x±s表示；來探討該生理排便反射通路的修復(fù)效果。
　　結(jié)果：①大鼠脊髓圓錐損傷后排便生理反射弧動物模型的建立：A組有3只死亡，B組有2只死亡予以剔除，術(shù)后排尿、排便與術(shù)前無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。A組術(shù)前、術(shù)后BBB評分為（20.50±0.25）、（18.60±0.18）分；B組為（20.32

5、±0.25）、（18.30±0.26）分，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。A組L6脊神經(jīng)前、后根神經(jīng)纖維分別為（362±24）、（538±20）根，S2脊神經(jīng)前后根神經(jīng)纖維分別為（336±18）、（480±22）根，B組L6、S2神經(jīng)根總干的神經(jīng)纖維為（878±34）、（782±28）根，組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。L6-S2脊神經(jīng)前、后根吻合口有髓纖維通過率分別為（68.86±5.62）％、（53.45±4.43）%

6、。單向方波（3mA、0.3ms）分別刺激A組S2后根吻合口近端和B組S2神經(jīng)根總干吻合口近端，均可記錄到直腸/肛管神經(jīng)叢動作電位，波幅分別為，（0.14±0.02）mV，（0.13±0.03） mV，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。②大鼠脊髓圓錐損傷后排便功能重建的初步觀察：每組大鼠均有3-4只死亡，其余的大鼠一般情況隨時間延長逐漸好轉(zhuǎn)；刺激各組動物實驗側(cè)S2后根吻合口近端，均可在肛管-直腸神經(jīng)叢記錄到動作電位，實驗側(cè)動作電位波幅逐漸

7、增大趨于接近正常，電刺激對側(cè)S2后根吻合口近端，未記錄到動作電位，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。脊神經(jīng)前后根吻合口甲苯胺藍染色顯示有較多的神經(jīng)纖維通過，有髓神經(jīng)纖維的數(shù)目明顯較頭端少，隨修復(fù)時間延長，有增多趨勢。脊髓圓錐損傷后T12～T13脊髓節(jié)段神經(jīng)細胞凋亡出現(xiàn)，呈現(xiàn)高表達，隨修復(fù)時間延長，有減少趨勢呈低表達或陰性表達。
　　結(jié)論：①大鼠脊髓圓錐損傷后排便生理反射弧動物模型的建立：將大鼠L6前、后根分別與S2前、后根端端吻合