PARP抑制劑PJ34對帕金森病模型鼠保護作用的研究.pdf

1、本文論述了PARP抑制劑PJ34對帕金森病模型鼠保護作用的研究。 研究方法： 健康雄性2～3月齡C57BL小鼠，采用腹腔注射給藥方式。小鼠隨機分為4組：對照組、PJ34組、MPTP組和PJ34+MPTP組。造模后10min觀察小鼠震顫、肌強直和運動減少情況，做爬桿試驗、懸掛試驗檢測行為學指標，以證明PD小鼠模型制備成功與否及PJ34對PD小鼠行為學指標的影響。造模后2h、24h、72h時間點取材中腦，做TH免疫組化染色和

2、尼氏染色觀察小鼠黑質(zhì)：DA能神經(jīng)元數(shù)量，透射電鏡觀察黑質(zhì)DA能神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的變化，PAR免疫組化染色和Westernblot方法檢測黑質(zhì)PARP活性改變，TUNEL染色觀察黑質(zhì)細胞凋亡情況，AIF免疫組化染色檢測黑質(zhì)AIF的核移位情況和蛋白表達水平，RT-PCR方法檢測黑質(zhì)AIF的mRNA表達變化，Western blot方法進行黑質(zhì)AIF核移位的半定量分析。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行單因

3、素方差分析，兩組間差異顯著性用t檢驗判定，P<0.05具有統(tǒng)計學意義。 研究結(jié)果： 1、小鼠行為學檢測結(jié)果MPTP組小鼠注射MPTP 3min后出現(xiàn)震顫、尾強直、爬桿緩慢、運動減少現(xiàn)象，持續(xù)約30min，證明PD小鼠模型制備成功。正常對照組和PJ34組小鼠無異常行為，PJ34對PD小鼠行為學指標有改善(P<0.05)。 2、尼氏染色和TH免疫組化染色檢測結(jié)果對照組和PJ34組各時間點SNc區(qū)尼氏染色陽性細胞數(shù)和T

4、H免疫陽性神經(jīng)元(TH．immunoreactive neurons,TH-IR)數(shù)較多，明顯多于MPTP組相應(yīng)時間點的陽性細胞數(shù)(P<0.01)。MPTP組與PJ34+MPTP組SNc區(qū)尼氏染色陽性細胞數(shù)和TH．IR神經(jīng)元數(shù)隨時間呈遞減趨勢，PJ34+MPTP組各時間點的尼氏染色陽性細胞數(shù)和TH-IR神經(jīng)元數(shù)明顯多于MPTP組(P<0.01)。 3、電鏡檢測結(jié)果MPTP組小鼠黑質(zhì)DA能神經(jīng)元減少，存活DA能神經(jīng)元損傷程度隨時間

5、加重，部分DA能神經(jīng)元出現(xiàn)核膜內(nèi)陷呈鋸齒狀，染色質(zhì)凝塊、邊聚，線粒體腫脹、嵴不清，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量減少。PJ34+MPTP組黑質(zhì)DA能神經(jīng)元損傷程度明顯減輕，線粒體形態(tài)基本未變，一些核膜輕度內(nèi)陷，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量較MPTP組增加。對照組和PJ34組黑質(zhì)DA能神經(jīng)元形態(tài)正常。 4、PARP活性檢測結(jié)果免疫組化染色顯示，對照組和PJ34組黑質(zhì)幾乎未見PAR合成，MPTP組SNc區(qū)細胞核內(nèi)出現(xiàn)PAR合成，2h時達高峰，之后隨時間呈下降趨勢

6、(P<0.01)。PJ34+MPTP組SNc區(qū)PAR合成減少，與MPTP組各時間點對比有顯著性差異(P<0.01)。 Western blot結(jié)果顯示，對照組和PJ34組黑質(zhì)未見PAR合成，MPTP組黑質(zhì)核蛋白出現(xiàn)PAR合成，于2h時達高峰，之后隨時間呈下降趨勢，72h仍見少量PAR合成(P<0.01)。PJ34+MPTP組黑質(zhì)僅2h時可以檢測到PAR特異性條帶，PJ34+MPTP組與MPTP組各時間點對比有顯著性差異(P<0.

7、01)。 5、TUNEL染色結(jié)果對照組和PJ34組黑質(zhì)幾乎未見TUNEL染色陽性細胞核，MPTP組SNc區(qū)出現(xiàn)TUNEL染色陽性細胞核，2h時達高峰，之后隨時間呈下降趨勢。PJ34+MPTP組SNc區(qū)TUNEL染色陽性細胞核明顯減少，與MPTP組各時間點對比有顯著性差異(P<0.05)。 6、AIF核移位和基因表達檢測結(jié)果免疫組化染色顯示，對照組和PJ34組SNc區(qū)幾乎未見AIF出現(xiàn)核移位，MPTP組SNc區(qū)出現(xiàn)AIF核

8、移位，2h時達高峰，之后隨時間呈下降趨勢。PJ34+MPTP組SNc區(qū)AIF核移位明顯減少。各組SNc區(qū)AIF蛋白表達水平無顯著性差異(P>0.05)。 Western blot結(jié)果顯示，對照組和PJ34組黑質(zhì)核蛋白未見AIF特異性條帶，MPTP組出現(xiàn)AIF特異性條帶，于2h時達高峰，之后隨時間呈下降趨勢(P<0.01)。PJ34+MPTP組黑質(zhì)僅2h時可以檢測到AIF特異性條帶，與MPTP組各時間點對比有顯著性差異(P<0.0