Bcl-2家族BH3-only蛋白在依托泊苷誘導胃腺癌細胞凋亡中的作用.pdf

1、背景：因為缺乏系統(tǒng)的治療方法，所以在治療晚期胃腺癌中一直沒有多大進展，這也主要歸咎于胃腺癌細胞對化療藥物誘導的凋亡產生抵抗。很多不同種類的化療藥物通過損傷細胞DNA，導致轉錄因子P53的激活，然后P53通過上調促凋亡蛋白例如Puma和Noxa來介導凋亡。臨床上常用的DNA損傷誘導劑依托泊苷是拓撲異構酶Ⅱ抑制劑，可與DNA拓撲異構酶Ⅱ相互作用，從而使DNA的單鏈和雙鏈斷裂。但是胃腺癌細胞對依托泊苷具有不同的敏感性，阻礙了其在臨床上的應用。

2、 目的：為了更好的理解依托泊苷誘導胃腺癌細胞凋亡的機制，特別是檢測Bcl-2家族BH3-only蛋白Noxa、Puma和Bim在決定胃腺癌細胞對依托泊苷誘導凋亡的敏感性中的作用，為臨床治療以及發(fā)現(xiàn)新的治療靶點尋找理論依據。方法：在不同時點向體外培養(yǎng)的SGC-7901、BGC-823細胞中加入不同劑量的依托泊苷，MTT法檢測依托泊苷處理后細胞生存率，確定依托泊苷的實驗劑量；流式細胞儀AnnexinV/PI雙染法檢測依托泊苷誘導的細

3、胞凋亡率；流式細胞儀檢測廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk對依托泊苷誘導細胞凋亡的抑制率；半定量RT-PCR和Westernblot分別檢測在依托泊苷誘導前后P53、Noxa、Bim、Puma的mRNA和蛋白的表達水平。 結果：依托泊苷以劑量、時間依賴的方式誘導胃腺癌細胞凋亡，SGC-7901細胞系比BGC-823更加敏感，100μM的依托泊苷作用48小時后SGC-7901的凋亡率達到50％，而BGC-823的凋亡率只有

4、20％。廣譜caspase抑制劑Z-VAD-fmk能有效抑制依托泊苷誘導的胃腺癌細胞凋亡，抑制率達50％以上，說明依托泊苷誘導胃腺癌細胞凋亡在很大程度上依賴caspase。在SGC-7901細胞系中依托泊苷作用后4小時就可以觀察到P53和它的轉錄目標Noxa的mRNA很快的上調，8小時可觀察到其蛋白質有明顯的增高；而在BGC-823細胞系中依托泊苷作用前后P53和Noxa的mRNA和蛋白質水平變化不大。另一個P53轉錄目標Puma在SG