大鼠胰島和睪丸支持細(xì)胞共移植治療糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究首先摸索和掌握了胰島和SC體外分離、培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù),其次針對(duì)SC對(duì)共移植的胰島在體內(nèi)發(fā)揮的免疫豁免作用進(jìn)行了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究.在此基礎(chǔ)上,應(yīng)用旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)體外共培養(yǎng)胰島和SC,使二者形成了支持細(xì)胞-胰島共聚物,通過對(duì)SICA體外胰島素分泌特性的檢測(cè)及糖尿病大鼠體內(nèi)移植的研究,為SC和胰島聯(lián)合體內(nèi)移植治療糖尿病奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).研究簡(jiǎn)述如下:在第一部分,采用V型膠原酶和應(yīng)用Ficoll不連續(xù)密度梯度離心法,從成年大鼠胰腺分離、純化

2、胰島,并對(duì)其進(jìn)行了鑒定.在此基礎(chǔ)上,將胰島在幾種不同細(xì)胞外基質(zhì)材料包被的培養(yǎng)板上培養(yǎng),并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了檢測(cè).結(jié)果表明:從大鼠胰腺中分離、純化的胰島,通過雙硫腙染色鑒定,其純度為80％,臺(tái)盼蘭染色結(jié)果表明其活力為90％.在不同基質(zhì)材料包被的培養(yǎng)板上培養(yǎng)胰島,經(jīng)生物學(xué)特性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Matrigel包被組上培養(yǎng)的胰島,其胰島素分泌特性最好.在第二部分,用V型膠原酶和胰酶系列消化SC,并從組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、透射電鏡檢測(cè)等多方面對(duì)SC進(jìn)行

3、鑒定.結(jié)果證實(shí),該部分分離、純化所得的細(xì)胞為純度較高的SC.在第三部分,首先建立了鏈尿佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病SD大鼠模型,然后將2000IEQ胰島和1×10<'5>、1×10<'6>、1×10<'7>SC分別植入糖尿病大鼠腎被膜下,用便攜式血糖儀檢測(cè)血糖,并進(jìn)行組織學(xué)染色.在第四部分,將胰島和SC在RCCS中共培養(yǎng),使二者形成SIC,首先應(yīng)用免疫組織化學(xué)和掃描電鏡觀察SICA,其次應(yīng)用放射免疫方法檢測(cè)SICA體外胰島素分泌特性.在此基礎(chǔ)上,