糖尿病對卵母細胞發(fā)育的影響及胰島移植治療方法的研究.pdf

1、目的:Ⅰ型糖尿病孕婦在懷孕期間面臨嚴重的生殖問題，如不育、流產(chǎn)、胎兒先天發(fā)育異常等等。越來越多證據(jù)表明糖尿病對胚胎的這種影響可能是由于母體的高糖環(huán)境影響到卵母細胞成熟造成的。胰島移植是否可以逆轉(zhuǎn)糖尿病對胚胎和卵母細胞成熟造成的影響、能否通過輔助干細胞治療的方法降低胰島移植中使用的免疫抑制劑對胚胎和卵母細胞成熟造成的影響等一系列問題需要進行系統(tǒng)的研究。為了解決這些問題，本文首先系統(tǒng)研究糖尿病對胚胎和卵母細胞成熟造成的影響;其次創(chuàng)新性的對比

2、研究了胰島素注射和胰島移植逆轉(zhuǎn)糖尿病對胚胎和卵母細胞成熟造成的影響的作用;最后，針對胰島移植中免疫抑制劑對卵母細胞和胚胎的副作用，研究iPS誘導的MSCs(induced pluripotentstem cell-derived mesenchymal stem cells，iPSC-MSCs)輔助胰島移植是否可以徹底逆轉(zhuǎn)糖尿病，保護卵母細胞免受高血糖和免疫抑制劑的危害。
　　 方法:(1)我們分別從小鼠卵母細胞核成熟、胞質(zhì)成熟

3、、孤雌胚胎發(fā)育等方面來探究糖尿病對卵母細胞造成影響。(2)為了探究胰島移植能否逆轉(zhuǎn)糖尿病對卵母細胞造成的損傷，我們采用了同種同基因胰島移植，從小鼠卵母細胞成熟相關(guān)的多項指標進行探究，并與胰島素注射組進了比較。(3)為了驗證iPSC-MSCs，我們采用流式細胞術(shù)檢測iPSC-MSCs表型，并誘導iPSC-MSCs向成骨細胞、脂肪細胞及內(nèi)皮細胞分化。(4)為了研究iPSC-MSCs輔助胰島移植是否可以徹底逆轉(zhuǎn)糖尿病，我們采用同種異體胰島移植

4、排斥模型，再聯(lián)合臨床一線藥物Rapa給藥治療，觀察移植物生存期的改變，并探討其可能的作用機制。
　　 結(jié)果:(1)跟對照組相比，糖尿病小鼠卵母細胞排卵量減半、紡錘體異常和染色體異常比例增加、非整倍體率增加、Mad2和Bub1 mRNA相對表達顯著增加、孤雌激活囊胚率明顯增加。(2)胰島移植使卵母細胞各項成熟指標均恢復正常，但胰島素注射不能。(3) iPSC-MSCs形態(tài)呈成纖維細胞樣、并高表達CD73、CD90、CD105，不表

5、達CD45、CD34、CD14。P18 iPSC-MSCs仍具有多項分化功能，可以向成骨細胞、脂肪細胞、內(nèi)皮細胞分化。(4)生存期數(shù)據(jù)表明單獨使用iPSC-MSCs不能明顯延長胰島生存期，但聯(lián)合低劑量Rapa可誘導移植物耐受，徹底逆轉(zhuǎn)了糖尿病。聯(lián)合組T細胞受到最明顯的抑制作用。我們分別從蛋白水平和分子水平對血清及移植物中各類細胞因子進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Th1、Th17類細胞因子受到抑制，Th2、Treg類細胞因子高表達，這說明iPSC-M

6、SCs與Rapa聯(lián)合用藥的作用機制是調(diào)節(jié)Th1/Th2、Treg/Th17平衡。
　　 結(jié)論:糖尿病影響小鼠卵母細胞核成熟、胞質(zhì)成熟以及孤雌胚胎發(fā)育能力，其可能機制是通過影響紡錘體檢測點Mad2和Bub1 mRNA的表達;并首次證實胰島移植可以徹底逆轉(zhuǎn)糖尿病對卵母細胞造成的損傷，并且治療效果優(yōu)于胰島素注射。我們研究發(fā)現(xiàn)iPSC-MSCs與Rapa通過調(diào)節(jié)Th1/Th2、Treg/Th17平衡來誘導胰島移植物耐受，并且降低了Rap