糖尿病對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育的影響及胰島移植治療方法的研究.pdf

1、目的:Ⅰ型糖尿病孕婦在懷孕期間面臨嚴(yán)重的生殖問題，如不育、流產(chǎn)、胎兒先天發(fā)育異常等等。越來越多證據(jù)表明糖尿病對(duì)胚胎的這種影響可能是由于母體的高糖環(huán)境影響到卵母細(xì)胞成熟造成的。胰島移植是否可以逆轉(zhuǎn)糖尿病對(duì)胚胎和卵母細(xì)胞成熟造成的影響、能否通過輔助干細(xì)胞治療的方法降低胰島移植中使用的免疫抑制劑對(duì)胚胎和卵母細(xì)胞成熟造成的影響等一系列問題需要進(jìn)行系統(tǒng)的研究。為了解決這些問題，本文首先系統(tǒng)研究糖尿病對(duì)胚胎和卵母細(xì)胞成熟造成的影響;其次創(chuàng)新性的對(duì)比

2、研究了胰島素注射和胰島移植逆轉(zhuǎn)糖尿病對(duì)胚胎和卵母細(xì)胞成熟造成的影響的作用;最后，針對(duì)胰島移植中免疫抑制劑對(duì)卵母細(xì)胞和胚胎的副作用，研究iPS誘導(dǎo)的MSCs(induced pluripotentstem cell-derived mesenchymal stem cells，iPSC-MSCs)輔助胰島移植是否可以徹底逆轉(zhuǎn)糖尿病，保護(hù)卵母細(xì)胞免受高血糖和免疫抑制劑的危害。
　　 方法:(1)我們分別從小鼠卵母細(xì)胞核成熟、胞質(zhì)成熟

3、、孤雌胚胎發(fā)育等方面來探究糖尿病對(duì)卵母細(xì)胞造成影響。(2)為了探究胰島移植能否逆轉(zhuǎn)糖尿病對(duì)卵母細(xì)胞造成的損傷，我們采用了同種同基因胰島移植，從小鼠卵母細(xì)胞成熟相關(guān)的多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行探究，并與胰島素注射組進(jìn)了比較。(3)為了驗(yàn)證iPSC-MSCs，我們采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)iPSC-MSCs表型，并誘導(dǎo)iPSC-MSCs向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞分化。(4)為了研究iPSC-MSCs輔助胰島移植是否可以徹底逆轉(zhuǎn)糖尿病，我們采用同種異體胰島移植

4、排斥模型，再聯(lián)合臨床一線藥物Rapa給藥治療，觀察移植物生存期的改變，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果:(1)跟對(duì)照組相比，糖尿病小鼠卵母細(xì)胞排卵量減半、紡錘體異常和染色體異常比例增加、非整倍體率增加、Mad2和Bub1 mRNA相對(duì)表達(dá)顯著增加、孤雌激活囊胚率明顯增加。(2)胰島移植使卵母細(xì)胞各項(xiàng)成熟指標(biāo)均恢復(fù)正常，但胰島素注射不能。(3) iPSC-MSCs形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣、并高表達(dá)CD73、CD90、CD105，不表

5、達(dá)CD45、CD34、CD14。P18 iPSC-MSCs仍具有多項(xiàng)分化功能，可以向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞分化。(4)生存期數(shù)據(jù)表明單獨(dú)使用iPSC-MSCs不能明顯延長胰島生存期，但聯(lián)合低劑量Rapa可誘導(dǎo)移植物耐受，徹底逆轉(zhuǎn)了糖尿病。聯(lián)合組T細(xì)胞受到最明顯的抑制作用。我們分別從蛋白水平和分子水平對(duì)血清及移植物中各類細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Th1、Th17類細(xì)胞因子受到抑制，Th2、Treg類細(xì)胞因子高表達(dá)，這說明iPSC-M

6、SCs與Rapa聯(lián)合用藥的作用機(jī)制是調(diào)節(jié)Th1/Th2、Treg/Th17平衡。
　　 結(jié)論:糖尿病影響小鼠卵母細(xì)胞核成熟、胞質(zhì)成熟以及孤雌胚胎發(fā)育能力，其可能機(jī)制是通過影響紡錘體檢測(cè)點(diǎn)Mad2和Bub1 mRNA的表達(dá);并首次證實(shí)胰島移植可以徹底逆轉(zhuǎn)糖尿病對(duì)卵母細(xì)胞造成的損傷，并且治療效果優(yōu)于胰島素注射。我們研究發(fā)現(xiàn)iPSC-MSCs與Rapa通過調(diào)節(jié)Th1/Th2、Treg/Th17平衡來誘導(dǎo)胰島移植物耐受，并且降低了Rap