Cx31致病突變的分析和Cx31組裝、運(yùn)輸及代謝機(jī)理研究.pdf

1、間隙連接通道(gap junctional channels)是相鄰細(xì)胞之間直接進(jìn)行小分子物質(zhì)(分子量<1000 Da,例如,離子、代謝產(chǎn)物和信使分子等)交換的通道.生物體通過這種通道進(jìn)行物質(zhì)和信息交換,使得細(xì)胞對(duì)環(huán)境的刺激作出協(xié)調(diào)一致的反應(yīng).為了系統(tǒng)地比較Cx31各類致病突變?cè)诩?xì)胞內(nèi)表達(dá)的差異,進(jìn)一步探明各類疾病的致病機(jī)理,我們選擇了11個(gè)已經(jīng)鑒定的致病突變和1個(gè)非致病突變,對(duì)它們的表達(dá)定位、對(duì)Triton X-100的可溶性等性質(zhì)進(jìn)

2、行了系統(tǒng)地分析.為了對(duì)Cx31的功能有更深入地了解,我們對(duì)野生型Cx31的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝機(jī)制進(jìn)行了深入地研究.在對(duì)野生型Cx31的組裝、運(yùn)輸及降解途徑進(jìn)行研究時(shí),我們將WT-Cx31分別裝入pEGFP-N1和pDNA3.1/myc-hisB(-)兩個(gè)載體,用穩(wěn)定表達(dá)Cx31融合蛋白的HeLa細(xì)胞進(jìn)行分析.采用BFA、cytoD和NOC分別破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)、肌動(dòng)蛋白纖維和微管,觀察這些結(jié)構(gòu)破壞后熒光染料calcein在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移的變化