忽地笑葉相關基因表達及克隆分析.pdf

1、忽地笑(Lycorisaurea)為石蒜屬植物代表種，是優(yōu)良的觀賞植物和藥用植物。國內外學者已經進行了一些研究，主要包括栽培繁育技術、染色體核型分析、重要藥用成分提取等方面，但是有關其遺傳發(fā)育方面的研究尚未見報道。本文利用基因芯片技術，開展了一種忽地笑突變體與野生型葉器官之間的基因表達差異分析，為進一步探討其葉發(fā)育分子機制提供了依據(jù)。 忽地笑屬平行脈序類型，主脈與各側脈縱向平行排列，各縱向脈之間有橫向二級側脈相連，一般二級側脈不

2、顯著。本研究所選材料為一種忽地笑突變型，稱為RaisedSecondaryLateralVeinsmutant(RSLV)，其葉片遠軸面二級側脈顯著凸起，部分葉片尖端彎曲；生長勢弱于野生型，葉色暗綠，相對較??；另外，雄蕊完全退化，成為只有雌蕊的重瓣單性花。 利用表達型噬菌體載體ZAP構建了野生型和突變體忽地笑葉片cDNA文庫，分別隨機挑取cDNA克隆進行5’端測序，共得到3122條有效ESTs。利用這些ESTs序列，設計512條

3、70mer的特異性序列作為寡核苷酸探針，代表512個基因，點制芯片，對忽地笑野生型和突變體葉器官進行了基因表達譜分析，比較二者間轉錄水平上的基因表達差異。芯片實驗結果進一步采用實時定量PCR技術驗證，最終確定所檢測的基因中，突變型和野生型有5個基因表達顯著差異，包括與維管發(fā)育和營養(yǎng)物質運輸相關的韌皮部蛋白2基因(phloemprotein2，PP2)；與鐵元素貯存、分配，維持細胞內鐵離子平衡相關的鐵蛋白(ferritin)基因；催化果膠