RNA干涉RPS12基因?qū)ξ赴┘毎飳W特性的影響及分子機制探討.pdf

1、胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類的健康。多種癌基因和抑癌基因的異常與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但是目前關(guān)于對胃癌防治具有重要意義的靶基因報道很少。因此，研究與胃癌密切相關(guān)的基因十分必要。為此本課題組前期應用抑制消減雜交(SSH)篩查發(fā)現(xiàn)一些在胃癌中差異表達的基因，進一步應用基因芯片、斑點雜交等技術(shù)檢測相關(guān)基因在異型增生、早期胃癌、進展期胃癌組織、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌以及癌旁組織中的表達，進一步證實了這些基因在胃癌發(fā)生發(fā)展不同階段的差異表達

2、情況。核糖體蛋白S12(Ribosomal protein S12，RPS12)基因是其中之一。該基因在胃癌發(fā)生發(fā)展不同階段病變的標本中表達增高，是胃癌發(fā)生、發(fā)展不同階段的重要差異表達基因。但是該基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用究竟如何，有待通過進一步實驗證實。在前期工作的基礎上，為深入研究RPS12基因在胃癌中的作用，本課題擬構(gòu)建RPS12基因shRNA表達載體，轉(zhuǎn)染胃癌細胞并證實對RPS12基因的抑制作用后，觀察對胃癌細胞生物學特性如細胞

3、凋亡、增殖的影響，并探討其分子機制。本研究將加深對胃癌分子機制的理解，并有望發(fā)現(xiàn)胃癌診治、預后判定的新標志。 材料及方法： 1．實驗材料：胃癌細胞系BGC823、RPMI1640培養(yǎng)基、TRIZOL Reagent、Taq DNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒(Qiagen)；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒(invnrogen)，BamH Ⅰ、HindⅢ、EcoR Ⅰ核酸內(nèi)切酶(Takara)；PI、JM109感受態(tài)細胞(聯(lián)星公

4、司)等。 2．實驗方法：應用重組DNA技術(shù)構(gòu)建RPS12特異性shRNA表達載體，基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將RPS12特異性shRNA表達載體轉(zhuǎn)染胃癌細胞，以scramble-shRNA為對照，RT-PCR方法檢測BGC823細胞中．RPS12基因的表達，證實干涉效應。MTT、流式細胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)分析RNA干涉后細胞增殖和凋亡，以探討RPS12基因?qū)ξ赴┘毎飳W特性的影響。同時采用RT-PCR檢測RNA干涉后