SDF-1—CXCR4軸對(duì)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文SDF1—CXCR4軸對(duì)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究姓名：龔啟梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：凌均棨20080510碩士學(xué)位論文SDF1CXCR4軸對(duì)人牙髓細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究方法：①采用酶消化組織塊法進(jìn)行HDPCs的原代培養(yǎng)：免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行細(xì)胞來(lái)源鑒定；取第3～5代HDPCs，MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)；間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)HDPCs上CxCIⅥ的表達(dá)情況。②用不同濃度LPs(01、l、lo、100“

2、∥m1)和TNFQ(1、10、100n∥m1)刺激HDPCs48h后，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中sDF—l含量的變化。③用含有不同濃度rhsDF1(5、50、100、200n∥m1)的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HDPCs48h和72h后，M1vr法觀察細(xì)胞增殖的情況；同時(shí)，ArulexinV／PI法觀察100n∥mlrhSDF1作用HDPCs48h時(shí)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。④體外趨化實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度rhSDF1(10、30、50、100n咖1)對(duì)H

3、DPCs遷移的影響。⑤用不同濃度rhSDF1(1、10、30、50、100ng／m1)的培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)HDPCs15d后，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ALP活性的變化。結(jié)果：①酶消化組織塊法可有效進(jìn)行HDPCs的原代培養(yǎng)。免疫細(xì)胞化學(xué)顯示所獲得的細(xì)胞均為抗波形絲蛋白染色陽(yáng)性，抗角蛋白染色陰性。MTT結(jié)果顯示細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性。免疫熒光顯示HDPCs胞膜表達(dá)CXCIH。②ELISA結(jié)果顯示未受刺激的對(duì)照組HDPCs分泌SDF—l，濃度約為(451355

4、l962918)p∥ml。不同濃度LPS和n師Q刺激HDPCs48h后，除100ng／mlTNF0【組外(p005)，其余各實(shí)驗(yàn)組的SDF1表達(dá)量均較對(duì)照組顯著降低(尸O05)。AnnexinV／PI結(jié)果提示loong／mlrhSDF1對(duì)HDPCs的凋亡無(wú)明顯影響(￡=0272，尸=o602)。④體外趨化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，除30ng／mlrhsDF1組外(戶(hù)|O05)，50n∥ml和100n∥ml兩濃度組與對(duì)照組問(wèn)均有顯著差異(尸001)，

5、且隨著rhSDF—l濃度的升高其趨化作用逐漸增強(qiáng)。相關(guān)分析表明，rhSDF1濃度與其趨化的細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)(，s=0634，尸001)。⑤不同濃度rhsDF—l作用于HDPcs15d后，除ln∥ml和10ng／ml兩濃度組外，其余各實(shí)驗(yàn)組ALP活性均明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。ALP活性在50n∥ml時(shí)達(dá)到最大值，超過(guò)此濃度時(shí)，其刺激作用不再隨濃度的升高而增強(qiáng)。結(jié)論：HDPCs表達(dá)CXCR4并分泌SDF1，LPS和TN