SDF-1α-CXCR4對(duì)THP-1細(xì)胞遷移及其與血管平滑肌細(xì)胞黏附的影響.pdf

1、趨化因子SDF-1α及其受體CXCR4在胚胎發(fā)育、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及介導(dǎo)免疫缺陷病毒(HIV)感染中發(fā)揮重要作用,最近又在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中發(fā)現(xiàn)SDF-1α高表達(dá),SDF-1α/CXCR4與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系已經(jīng)引起重視。
　　本研究首先探討 SDF-1α對(duì)單核細(xì)胞的趨化作用,然后在 Ox-LDL處理的血管平滑肌細(xì)胞和單核細(xì)胞上對(duì) SDF-1α/CXCR4的表達(dá)進(jìn)行研究,最后對(duì)SDF-1α/CXCR4在單核細(xì)胞/血管平滑肌細(xì)胞黏附的作

2、用進(jìn)行研究。
　　目的:探討SDF-1α對(duì)單核細(xì)胞趨化作用及其Ox-LDL、苦瓜蛋白對(duì)SDF-1α趨化單核細(xì)胞的影響;Ox-LDL對(duì)THP-1細(xì)胞CXCR4、rVSMC的SDF-1α表達(dá)的影響;SDF-1α/CXCR4對(duì)THP-1/rVSMC黏附的影響。
　　方法:用小室遷移試驗(yàn)來(lái)研究 SDF-1α對(duì)單核細(xì)胞的趨化作用,將單核細(xì)胞或經(jīng)Ox-LDL處理的單核細(xì)胞加入上室,在上、下室分別加入苦瓜蛋白、SDF-1α孵育10小時(shí)后計(jì)

3、數(shù)各組下室遷移的細(xì)胞數(shù)。RT-PCR檢測(cè) CXCR4或 SDF-1αmRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)變化,觀察ox-LDL對(duì)THP-1細(xì)胞CXCR4、rVSMC的SDF-1α表達(dá)的劑量和時(shí)間效應(yīng)。用免疫組化檢測(cè)SDF-1α在頸總動(dòng)脈套環(huán)兔模型中的表達(dá)變化。用靜態(tài)黏附實(shí)驗(yàn)來(lái)研究THP-1/rSMC的黏附,原代培養(yǎng)的rVSMC與50μg/ml Ox-LDL孵育48h,將單核細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞共孵育后洗脫檢測(cè)黏附作用,并加

4、用SDF-1α抗體阻斷。
　　結(jié)果:SDF-1α呈濃度依賴性誘導(dǎo)單核細(xì)胞的遷移,加入CXCR4抗體可明顯抑制這種作用。經(jīng)不同濃度Ox-LDL處理48h后的THP-1細(xì)胞再用10ng/ml SDF-1α進(jìn)行趨化時(shí),結(jié)果發(fā)現(xiàn) Ox-LDL呈濃度依賴性的增加單核細(xì)胞的遷移,50μg/ml Ox-LDL組所遷移的細(xì)胞數(shù)是對(duì)照組的11倍?？喙系鞍讋t呈濃度依賴性的抑制單核細(xì)胞的遷移。THP-1細(xì)胞有基礎(chǔ)水平的CXCR4表達(dá),50μg/ml O

5、x-LDL可使CXCR4的表達(dá)上調(diào)4-5倍。CXCR4上調(diào)最早在6小時(shí)內(nèi)發(fā)生,12小時(shí)達(dá)峰。培養(yǎng)的rVSMC亦有基礎(chǔ)水平的SDF-1α表達(dá),且在0-50μg/ml范圍內(nèi),Ox-LDL呈濃度依賴性的上調(diào)SDF-1α表達(dá),50μg/ml可使SDF-1α上調(diào)約5倍;經(jīng)50μg/ml ox-LDL刺激0-48h,12h出現(xiàn)小峰,隨后逐漸下降,但48h再度增高。Ox-LDL呈濃度依賴性的增加 THP-1/rVSMC的黏附,50μg/ml Ox-L