SDF-1—CXCR4軸對人牙髓細胞生物學效應的研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文SDF1—CXCR4軸對人牙髓細胞生物學效應的研究姓名：龔啟梅申請學位級別：碩士專業(yè)：口腔基礎醫(yī)學指導教師：凌均棨20080510碩士學位論文SDF1CXCR4軸對人牙髓細胞生物學效應的研究方法：①采用酶消化組織塊法進行HDPCs的原代培養(yǎng)：免疫細胞化學進行細胞來源鑒定；取第3～5代HDPCs，MTT法測定細胞生長曲線；間接免疫熒光技術檢測HDPCs上CxCIⅥ的表達情況。②用不同濃度LPs(01、l、lo、100“

2、∥m1)和TNFQ(1、10、100n∥m1)刺激HDPCs48h后，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中sDF—l含量的變化。③用含有不同濃度rhsDF1(5、50、100、200n∥m1)的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HDPCs48h和72h后，M1vr法觀察細胞增殖的情況；同時，ArulexinV／PI法觀察100n∥mlrhSDF1作用HDPCs48h時對細胞凋亡的影響。④體外趨化實驗觀察不同濃度rhSDF1(10、30、50、100n咖1)對H

3、DPCs遷移的影響。⑤用不同濃度rhSDF1(1、10、30、50、100ng／m1)的培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)HDPCs15d后，檢測細胞內(nèi)ALP活性的變化。結果：①酶消化組織塊法可有效進行HDPCs的原代培養(yǎng)。免疫細胞化學顯示所獲得的細胞均為抗波形絲蛋白染色陽性，抗角蛋白染色陰性。MTT結果顯示細胞具有較強的增殖活性。免疫熒光顯示HDPCs胞膜表達CXCIH。②ELISA結果顯示未受刺激的對照組HDPCs分泌SDF—l，濃度約為(451355

4、l962918)p∥ml。不同濃度LPS和n師Q刺激HDPCs48h后，除100ng／mlTNF0【組外(p005)，其余各實驗組的SDF1表達量均較對照組顯著降低(尸O05)。AnnexinV／PI結果提示loong／mlrhSDF1對HDPCs的凋亡無明顯影響(￡=0272，尸=o602)。④體外趨化實驗結果顯示，除30ng／mlrhsDF1組外(戶|O05)，50n∥ml和100n∥ml兩濃度組與對照組問均有顯著差異(尸001)，

5、且隨著rhSDF—l濃度的升高其趨化作用逐漸增強。相關分析表明，rhSDF1濃度與其趨化的細胞數(shù)呈正相關(，s=0634，尸001)。⑤不同濃度rhsDF—l作用于HDPcs15d后，除ln∥ml和10ng／ml兩濃度組外，其余各實驗組ALP活性均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P001)。ALP活性在50n∥ml時達到最大值，超過此濃度時，其刺激作用不再隨濃度的升高而增強。結論：HDPCs表達CXCR4并分泌SDF1，LPS和TN