SDF-1α-CXCR4對大鼠動脈損傷后內膜增生的影響.pdf

1、研究背景： 急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是冠心病(coronary heart disease，CHD)患者致死致殘的主要原因，經皮冠脈內支架植入術(percutaneous coronary intervention，PCI)是拯救患者生命的重要措施，然而PCI術后較高的狹窄率(約20％)卻限制了其推廣。目前研究認為，影響PCI術后再狹窄的主要因素包括局部動脈損傷和異體炎癥反應

2、、血小板聚集和血栓形成、細胞外基質代謝紊亂、血管平滑肌細胞的移行和增殖、血管內皮延遲愈合等，各種因素綜合作用導致血管新生內膜增生，最終管腔變小，因此如果能最大限度地抑制新生內膜的增生，即能降低PCI術后再狹窄的發(fā)生率。 基質細胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)又稱為趨化因子CXCL12(chemokine ligand12)是化學趨化因子超家族中的一員，參與調節(jié)體內許多重要的生

3、理過程，其受體CXCR4是一個G蛋白偶聯(lián)的7次跨膜受體，它在體內許多組織、器官上均有廣泛表達。SDF-1基因編碼了3個同源異型體α、β、γ，心肌缺血或血管損傷時，局部SDF-1α表達增加，吸引外周循環(huán)中CD34+CXCR4+細胞到達缺血或損傷部位，參與修復過程。 目的： 本研究觀察大鼠頸總動脈球囊損傷術后，SDF-1α及其受體CXCR4在損傷局部的表達情況，并通過應用SDF-1α siRNA或CXCR4受體拮抗劑AMD3

4、100觀察SDF-1α與CXCR4之間的相互作用對損傷血管新生內膜形成的影響。 方法： 構建SD大鼠頸總動脈球囊損傷模型，體外培養(yǎng)損傷術后血管平滑肌細胞及骨髓間充質細胞，應用SDF-1α siRNA干預后，分別于干預前后應用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中SDF-1α濃度，MTT法檢測細胞增殖，Transwell Chamber法檢測細胞遷移，PCR、Western blot法檢測細胞SDF-1α和CXCR4基因、蛋白的

5、表達；體內實驗在構建SD大鼠頸總動脈球囊損傷模型后，應用CXCR4受體拮抗劑AMD3100干預，檢測干預前后血漿SDF-1α濃度，外周血循環(huán)中CD34+CXCR4+細胞數(shù)量，組織中SDF—1α，和CXCR4基因、蛋白的表達，并應用免疫組化法檢測干預前后損傷血管內膜上CXCR4的表達情況。 結果： (一)體外實驗： 1.SD大鼠頸總動脈球囊損傷術后，在體外培養(yǎng)的損傷平滑肌細胞中，SDF-1α的基因表達增加，細胞培養(yǎng)

6、上清液中的SDF-1α濃度亦升高；應用SDF-1α siRNA干預后，損傷平滑肌細胞中SDF-1α的基因表達受到抑制，細胞培養(yǎng)上清液中的SDF-1α濃度亦減少； 2.體外培養(yǎng)的損傷后血管平滑肌細胞對骨髓間充質細胞的趨化能力增強；應用SDF-1α siRNA干預后，損傷平滑肌細胞對骨髓間充質細胞的趨化能力受到抑制；應用AMD3100干預后，損傷平滑肌細胞對骨髓間充質細胞的趨化能力亦減弱； 3.體外培養(yǎng)的損傷后骨髓間充質細胞

7、對SDF-1α的遷移能力增加；應用SDF-1α siRNA或AMD3100干預后，骨髓間充質細胞對SDF-1α的遷移能力受到了抑制； (二)體內實驗： 1.SD大鼠頸總動脈球囊損傷術后，血漿SDF-1α水平增加，在術后24h達到高峰，術后7d回復基礎水平；外周血循環(huán)中CD34+CXCR4+細胞數(shù)目增加； 2.在損傷的頸總動脈組織中，SDF-1α和CXCR4的基因和蛋白表達增加，SDF-1α的表達在術后1d達峰值，

8、而CXCR4的基因和蛋白表達則隨時間逐漸增強； 3.當應用CXCR4受體拮抗劑AMD3100干預時，外周血循環(huán)中血漿SDF-1α水平不受影響；CD34+CXCR4+細胞數(shù)目在術后即刻增加，其它時間點不受影響； 4.免疫組化發(fā)現(xiàn)，損傷的頸總動脈內膜在術后1d即有CXCR4受體的表達，隨后逐漸增強；應用了AMD3100拮抗后，內膜中CXCR4陽性反應在術后4d才出現(xiàn)，且反應較弱。 結論： 在血管損傷時，平滑肌