蚊-鳥-蚊循環(huán)在西尼羅病毒傳播中的作用研究.pdf

1、西尼羅病毒(west Nile virus，WNV)屬于黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬(genus Flavivirus)，可導(dǎo)致人類西尼羅熱或西尼羅腦炎，該病是由WNV引起，經(jīng)蚊蟲傳播，以鳥類為主要宿主動(dòng)物的自然疫源性疾病。西尼羅病毒在自然界中的傳播循環(huán)為鳥一蚊一鳥，人和馬可作為該病毒的偶然宿主。 自1937年首次從烏干達(dá)西尼羅地區(qū)分離到WNV以來(lái)，西尼羅熱在非洲、中東和歐亞大陸呈散發(fā)流行。然而，上世紀(jì)90年代以

2、來(lái)，該病的流行趨勢(shì)發(fā)生了重大變化，出現(xiàn)暴發(fā)流行的地區(qū)增多，尤其1999年在美國(guó)紐約首次暴發(fā)西尼羅病毒感染，在隨后幾年內(nèi)迅速擴(kuò)散到幾乎美國(guó)本土所有的州，并到達(dá)加拿大、墨西哥、加勒比海地區(qū)，表明它不再局限于東半球，而是迅速向西半球蔓延。發(fā)病率大幅度增加，且伴隨著非常高的鳥類病死率，WNV已成為嚴(yán)重危害公共衛(wèi)生健康的新發(fā)傳染病之一。目前，已從至少332種鳥體內(nèi)檢測(cè)到WNV感染，包括雀形目(Passeriformes)、雁形目(Anserifo

3、rmes)、隼形目(Falconiformes)、雞形目(Galliformes)、鶚形目(Caprimulgiformes)、鸚形目(Psittaciformes)等的種類。其中雀形目有129種鳥感染病毒，鴉科、雀科、森鶯科感染病毒鳥種數(shù)目較多；另一方面，目前報(bào)道有約80余種蚊蟲感染西尼羅病毒，其中大部分為庫(kù)蚊屬。 我國(guó)地域遼闊，有大量的鳥類棲息地和候鳥越冬地，生態(tài)環(huán)境豐富，具備病毒自然循環(huán)所需的宿主、媒介和適宜的生境。由于W

4、NV的媒介種類和動(dòng)物宿主繁多，而作為擴(kuò)散宿主的候鳥，具有長(zhǎng)途遷徙的習(xí)性，存在WNV隨候鳥進(jìn)入我國(guó)的途徑；此外，染毒家禽、鳥的合法和/或非法貿(mào)易增加了WNV輸入的可能性；并且，國(guó)外研究證實(shí)能夠感染和傳播WNV的蚊蟲種類在我國(guó)也有廣泛的分布，其中國(guó)內(nèi)尖音庫(kù)蚊復(fù)合組主要成員、三帶喙庫(kù)蚊(Cluex tritaeniorhynchus)、白紋伊蚊(Aedesalbopictus)和埃及伊蚊(Ae．Aegypti)作為WNV潛在媒介已得到證實(shí)，一

5、定程度上增加了中國(guó)出現(xiàn)WNV暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。以往的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明我國(guó)人群和鳥體內(nèi)有wNV抗體存在，由于同屬的JEV在我國(guó)長(zhǎng)期存在，而JEV和WNV之間存在一定的抗原交叉反應(yīng)，鳥體內(nèi)的JEV抗體對(duì)WNV感染有無(wú)一定的保護(hù)作用，值得探討。本研究通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)研究蚊蟲對(duì)WNV潛在宿主的嗜血習(xí)性、自然界中潛在宿主和媒介攜帶病毒的檢測(cè)，并以WNV對(duì)經(jīng)乙腦疫苗免疫的來(lái)亨雞進(jìn)行攻毒，模擬自然界中存在JEV抗體的鳥對(duì)WNV攻毒的敏感性，以此進(jìn)行WNV潛在

6、媒介、宿主和病毒相互作用的研究并分析其在病毒傳播循環(huán)中的作用，為制定針對(duì)WNV潛在媒介和宿主的有效防控策略提供依據(jù)。 取得的主要結(jié)果如下： 1．野外現(xiàn)場(chǎng)動(dòng)物誘餌對(duì)蚊蟲的誘集研究在傍山鄉(xiāng)鎮(zhèn)現(xiàn)場(chǎng)，各種動(dòng)物組與對(duì)照相比較，誘集到的淡色庫(kù)蚊(Cx．pipienspallens)數(shù)量具有顯著性差異；家雞對(duì)淡色庫(kù)蚊的誘集效果較大白鼠、麻雀明顯要高(SE均為54.39，T值分別為0.002和0.006)，而家鴿與家雞對(duì)淡色庫(kù)蚊的誘集效

7、果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(SE為54.39，T值為0.057)。多水系農(nóng)村現(xiàn)場(chǎng)動(dòng)物誘餌組與對(duì)照相比較，誘集到的淡色庫(kù)蚊數(shù)量具有顯著性差異，家雞的誘集效果較大白鼠、家鴿、兔明顯要高(F值為997.661，P值為0.000)。同種蚊蟲在不同動(dòng)物廄舍內(nèi)采集的數(shù)量存在顯著性差異(F值為6.950，P值為0.000)：淡色庫(kù)蚊在綿羊圈中最多，而中華按蚊(Anopheles sinensis)、三帶喙庫(kù)蚊在奶牛圈中最多；同一動(dòng)物廄舍采集的不同蚊蟲存在顯著性差

8、異(F值為17.150，P值為0.000)：奶牛圈中華按蚊、三帶喙庫(kù)蚊最多，豬圈中淡色庫(kù)蚊、三帶喙庫(kù)蚊最多，鴿舍中淡色庫(kù)蚊最多，綿羊圈中淡色庫(kù)蚊最多，雞圈中淡色庫(kù)蚊和和三帶喙庫(kù)蚊數(shù)量相當(dāng)。 2．野外現(xiàn)場(chǎng)采集的吸血蚊胃血來(lái)源分析對(duì)現(xiàn)場(chǎng)采集的吸血蚊提取基因組DNA，以PCR擴(kuò)增分析其胃血來(lái)源。淡色庫(kù)蚊、三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊、兇小庫(kù)蚊(Cx．modestus)、騷擾阿蚊(Armigeres subalbatus)、白紋伊蚊的胃血均只擴(kuò)

9、增到哺乳動(dòng)物細(xì)胞色素B基因(Cytb)片段，未擴(kuò)增到鳥Cytb片段。提示現(xiàn)場(chǎng)采集的吸血蚊只吸到哺乳動(dòng)物血液，而未吸到鳥類血液。 3．野外現(xiàn)場(chǎng)采集蚊蟲、野鳥血和雞血的病毒檢測(cè)對(duì)采自野外現(xiàn)場(chǎng)的蚊蟲、野鳥血和雞血進(jìn)行的西尼羅病毒、乙腦病毒、西方馬腦炎病毒的RT-PCR檢測(cè)表明：除有2只普通朱雀檢測(cè)到西尼羅病毒陽(yáng)性片段外，淡色庫(kù)蚊、三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊、兇小庫(kù)蚊、騷擾阿蚊、白紋伊蚊、雞血樣和其余20種野鳥67份血樣均未檢測(cè)到西尼羅病毒陽(yáng)

10、性片段；所有蚊蟲、野鳥血、雞血樣均未檢測(cè)到乙腦病毒、西方馬腦炎病毒的陽(yáng)性片段。RT-PCR陽(yáng)性的2只普通朱雀組織中未能檢測(cè)到西尼羅病毒抗原陽(yáng)性；西尼羅病毒抗體檢測(cè)的鳥血樣為陰性。檢測(cè)到的WNV陽(yáng)性片段序列經(jīng)同源性比較，提示為WNV核酸片段。對(duì)這3個(gè)核酸片段的序列分析表明它們與西尼羅病毒Chin-01株同源性最高(97.3％-100％)，與Eg101株、NY99株、Texas株和EnthAn株同源性較高(96％-99％)；支序圖表明它們與