西尼羅病毒檢測體系的初步建立.pdf

1、西尼羅病是由西尼羅病毒引起的人畜共患、蟲媒傳播的自然疫源性疾病。早在1937年，Smith Burr及其同事從烏干達的西尼羅河地區(qū)一個受感染婦女的血液中首先分離到該病毒，命名為西尼羅病毒。 西尼羅病并不是一種新發(fā)傳染病，只是多數(shù)感染者為隱性感染或低熱等非特異性癥狀，因此并未引起研究人員的注意。直到20世紀90年代，尤其是1999年在紐約的暴發(fā)流行，導致了人群大規(guī)模感染和高死亡率，并伴隨大量的鳥類、家禽、馬和牛等的死亡，才引起全球

2、公共衛(wèi)生界的關注。 雖然我國尚無WND報道，但由于我國存在著WND輸入和流行的自然因素和社會因素，需高度警惕，開展WNV監(jiān)測，防止WND傳入，WNV監(jiān)測方法的建立對保護人群健康，維護社會穩(wěn)定和經(jīng)濟發(fā)展具有重要意義在本研究中，采用RT-PCR擴增WNV C-preM蛋白區(qū)基因片段，將其克隆至T載體，測序并進行同源性分析。以陽性質(zhì)粒為模板，建立Nested-PCR和Real-time PCR檢測方法，并進行敏感性和特異性檢測。所建立

3、的Nested-PCR法和Real-time PCR法可分別檢測到1和10拷貝的西尼羅病毒RNA。而對其他黃病毒科成員的檢測均為陰性，表明該方法是特異的。 采用RT-PCR方法，擴增WNV E基因D3區(qū)，將其克隆至PET32a載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-D3，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，經(jīng)1.0 mmol/LIPTGG誘導，外源基因以可融性蛋白形式獲得高效表達。以純化后表達產(chǎn)物作為診斷抗原包被酶標板，建立了檢測西尼羅熱病毒(