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文檔簡介
1、第一部分乳腺癌T47D細胞ER的表達及TAM治療后的表達改變
目的:研究測定乳腺癌T47D細胞ERα和ERβ的表達及經(jīng)TAM作用后的改變情況。
方法:在凹形細胞培養(yǎng)皿內(nèi)接種的細胞數(shù)量為1×104個/皿,培養(yǎng)24小時后,利用免疫熒光的方法測定ERα和ERβ的表達情況。采用細胞增殖和細胞毒性檢測試劑(CCK-8)法,在96孔板內(nèi)接種的細胞數(shù)量為1×104/孔,分別測定加入不同濃度的TAM(0~1.0×10-5mol/L)
2、200μl,培養(yǎng)24h后的細胞生長抑制率,并計算TAM的半數(shù)致死劑量(IC50),用所得IC50處理細胞24h后,利用免疫熒光的方法測定ERα和ERβ的改變情況,并利用蛋白印跡(Western Blot)的方法驗證免疫熒光法的結(jié)果。
結(jié)果:經(jīng)免疫熒光法測定乳腺癌T47D細胞表達ERα和ERβ。在濃度為0、1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6、1.0×10-5mol/L的TAM作用下,T47D細胞的生長抑制率分別
3、為(9.88±3.41)%、(23.61±3.30)%、(32.76±5.99)%、(48.85±1.90)%和(64.86±2.54)%。IC50約為1.0×10-6mol/L。免疫熒光法測得TAM作用T47D細胞后ERα下調(diào)(對照組144.73±25.19,TAM組92.11±15.48);ERβ無明顯改變(對照組248.44±6.92,TAM組247.95±7.66)。Western Blot的結(jié)果與免疫熒光結(jié)果相一致。
4、 結(jié)論:乳腺癌T47D細胞株同時表達ERα和ERβ兩種受體,TAM主要作用于ERα,使其表達下降,ERβ的表達無明顯改變。
第二部分TAM對乳腺癌T47D細胞18F-FDG攝取的影響
目的:研究測定乳腺癌T47D細胞經(jīng)TAM作用后對細胞攝取18F-FDG的影響及與ER表達的關(guān)系。
方法:采用細胞增殖和細胞毒性檢測試劑(CCK-8)法,在96孔板內(nèi)接種的細胞數(shù)量為1×104/孔,分別測定加入不同濃度的TAM(
5、0~1.0×10-5 mol/L)200μl,培養(yǎng)24h后的細胞生長抑制率。在六孔板內(nèi)接種的細胞數(shù)量為1×106/孔,分別測定加入不同濃度的TAM(0~1.0×10-5 mol/L)2ml、培養(yǎng)24h后的測定18F-FDG的細胞攝取率,并計算18F-FDG的細胞攝取抑制率。在凹形細胞培養(yǎng)皿內(nèi)接種的細胞數(shù)量為1×104個/皿,培養(yǎng)24小時后,分別加入不含任何藥物的培養(yǎng)基、含TAM濃度為1×10-6mol/L的培養(yǎng)基及與TAM量相等體積的無
6、水乙醇的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后,利用免疫熒光的方法測定ERα和ERβ的表達情況。
結(jié)果:TAM濃度分別為0、1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6和1.0×10-5 mol/L的情況下作用24h后,細胞生長抑制率分別為(9.88±3.41)%、(23.61±3.30)%、(32.76±5.99)%、(48.85±1.90)%和(64.86±2.54)%。細胞18F-FDG攝取抑制率分別為(4.40±1.94)%、
7、(6.73±3.88)%、(13.00±4.93)%、(44.11±5.33)%和(61.97±8.76)%。免疫熒光法測得TAM作用T47D細胞后ERα下調(diào)(對照組178.83±15.11,TAM組111.27±18.19);ERβ無明顯改變(對照組230.25±13.37,TAM組233.80±12.30)。
結(jié)論:TAM作用24h后引起乳腺癌T47D細胞的18F-FDG細胞攝取率下降,且TAM作用后ERα的表達下降與18
8、F-FDG的攝取下降呈正相關(guān)性。
第三部分乳腺癌T47D細胞18F-FDG攝取實驗方法探討
目的:以乳腺癌T47D細胞及其與化療藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)作用后18F-FDG的攝取改變?yōu)槔?,探討實驗方法改進方面的意見。
方法:在不同條件下測定乳腺癌T47D細胞的18F-FDG細胞攝取率,細胞數(shù)量為1×104~5×106/孔,18F-FDG放射性活度為1.85~29.6kBq,反應(yīng)時間為20~120min,
9、葡萄糖濃度為0~11mol/L,無糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的時間為0~12h。采用細胞增殖和細胞毒性檢測試劑(CCK-8)法分別測定加入不同劑量(0~8.0×10-6mol/L)5-FU200μl,培養(yǎng)24h后測定細胞生長抑制率。測定加入不同劑量(0~8.0×10-6mol/L)5-FU2ml,培養(yǎng)24h后18F-FDG的細胞攝取率。
結(jié)果:當每孔1×106個細胞、加入3.7kBq18F-FDG、葡萄糖濃度為0mol/L、作用時間為100
10、min、無糖培養(yǎng)基培養(yǎng)時間為6h時,細胞攝取率可達到(28.07±0.45)%。加入1.0×10-6、2.0×10-6、4.0×10-6和8.0×10-6mol/L5-FU24h后,細胞生長抑制率分別為(26.96±1.33)%、(42.94±2.25)%、(52.65±2.10)%和(60.03±4.35)%。細胞攝取抑制率分別為(17.86±2.96)%、(28.44±7.10)%、(42.62±3.62)%和(69.02±4.03
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