IL-33誘生的供者來(lái)源BMDC輸注延長(zhǎng)同種異體小鼠皮膚移植物生存時(shí)間及機(jī)制.pdf

1、IL-33是IL-1家族成員,最近有文獻(xiàn)報(bào)道它能在體外誘導(dǎo)小鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞(BMDC)的生長(zhǎng)和分化。而近年來(lái)有研究表明,在移植術(shù)前過繼輸注供者骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞可有效促進(jìn)免疫耐受,明顯延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間。其中,未成熟樹突狀細(xì)胞(iDC)在器官移植中具有更強(qiáng)的誘導(dǎo)外周免疫耐受的效應(yīng),而CD103+的樹突狀細(xì)胞也能通過促進(jìn)機(jī)體調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的分化從而誘導(dǎo)免疫耐受。迄今為止,關(guān)于IL-33誘導(dǎo)的BMDC與“經(jīng)典方法”(用G

2、M-CSF)培養(yǎng)的BMDC在表型及功能上有何不同以及受者輸注IL-33誘生的供者來(lái)源的BMDC是否能更有效的延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間尚不明確,本課題對(duì)此進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。
　　目的:以IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)供者小鼠的BMDC,以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表型,并將其過繼輸注給受者后行皮膚移植術(shù),觀察受者皮膚移植物存活時(shí)間及皮膚移植術(shù)后受者體內(nèi)T細(xì)胞亞群分化情況。同時(shí)在體外進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),檢測(cè)同種反應(yīng)T細(xì)胞增殖及亞群分化特征,為闡明IL-33誘

3、導(dǎo)的BMDC抑制同種反應(yīng)T細(xì)胞分化而保護(hù)移植物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:以IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)供者小鼠的BMDC,以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表型(MHC-Ⅱ、CD86、CD80、CD103分子表達(dá)水平)。將IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)供體小鼠來(lái)源的BMDC與異基因受者小鼠來(lái)源的脾臟na(i)ve T細(xì)胞共培養(yǎng)7天后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)體系中同種反應(yīng)T細(xì)胞增殖情況及T細(xì)胞亞群(Th1,Th17,CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T細(xì)胞)的比例。

4、將IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)供體小鼠來(lái)源的BMDC經(jīng)尾靜脈輸注異基因受者小鼠,7天后對(duì)受者進(jìn)行皮膚移植,觀察皮膚移植物存活時(shí)間,并在移植后第3、5、7天分別取受者脾臟細(xì)胞行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè),以觀察其T細(xì)胞亞群的比例變化。
　　結(jié)果:
　　一、體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)的供者BMDC的表型及其對(duì)受者T細(xì)胞增殖和分化的影響
　　1、IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)的供者BMDC的MHC-II、CD86、CD80、CD103的表達(dá)水平
　

5、　在體外將重組小鼠來(lái)源IL-33以終濃度為10ng/ml加入培養(yǎng)體系培養(yǎng)BALB/c(H-2 d)小鼠骨髓細(xì)胞,以重組小鼠來(lái)源GM-CSF(終濃度10ng/ml)誘導(dǎo)培養(yǎng)的BALB/c(H-2 d)小鼠BMDC作為對(duì)照,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè),與對(duì)照BMDC相比較,IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)的BMDC低表達(dá)MHC-Ⅱ、CD86、CD80分子,為未成熟DC,但高表達(dá)CD103。
　　2、IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)的供者BMDC與受者na(i)ve T細(xì)胞

6、混合培養(yǎng)后受者T細(xì)胞增殖、亞群分化情況
　　以重組小鼠來(lái)源IL-33以終濃度為10ng/ml加入培養(yǎng)體系體外培養(yǎng)BALB/c(H-2 d)小鼠骨髓細(xì)胞,將其誘導(dǎo)培養(yǎng)出的BMDC經(jīng)絲裂霉素C處理后與C57BL/6小鼠脾臟來(lái)源的na(i)ve T細(xì)胞共培養(yǎng)7天(IL-33組),將以重組小鼠來(lái)源GM-CSF(終濃度10ng/ml)誘導(dǎo)培養(yǎng)的BALB/c小鼠BMDC經(jīng)絲裂霉素C處理后與C57BL/6(H-2 b)小鼠脾臟來(lái)源的na(i)v

7、e T細(xì)胞共培養(yǎng)7天的培養(yǎng)體系為對(duì)照組(GM-CSF組),用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)C57BL/6(H-2 b)小鼠脾臟來(lái)源的T細(xì)胞增殖及Th1、Th17、CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T細(xì)胞比例。IL-33組的T細(xì)胞增殖及Th1、Th17、CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T細(xì)胞比例明顯較GM-CSF組低。
　　二、IL-33誘導(dǎo)培養(yǎng)的供者BMDC對(duì)同種異體小鼠皮膚移植物生存時(shí)間及T細(xì)胞亞群分化的影響
　　將IL

8、-33及GM-CSF誘導(dǎo)培養(yǎng)的BALB/c(H-2 d)小鼠來(lái)源的BMDC分別過繼輸注給C57BL/6(H-2 b)小鼠7天后,進(jìn)行皮膚移植,觀察發(fā)現(xiàn)輸注過IL-33誘導(dǎo)的BALB/c(H-2 d)小鼠來(lái)源的BMDC的C57BL/6(H-2 b)小鼠的皮膚移植物存活時(shí)間較輸注過GM-CSF誘導(dǎo)的BALB/c(H-2 d)小鼠來(lái)源的BMDC的C57BL/6(H-2 b)小鼠顯著延長(zhǎng),并且其脾臟中的Th1,Th17,CD8+IFN-γ+及C