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1、目的:胰島細(xì)胞移植是治療Ⅰ型糖尿病最有希望的方法,由于供體細(xì)胞不足和免疫排斥反應(yīng)等問(wèn)題,限制了胰島細(xì)胞移植技術(shù)的應(yīng)用。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)具有獲得容易,可體外復(fù)制和增殖,可以定向誘導(dǎo)分化為特定功能細(xì)胞的特征。因此,將BMSCs移植用于治療糖尿病具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。目前,尚未獲得誘導(dǎo)干細(xì)胞向胰島細(xì)胞分化的高效誘導(dǎo)方法;取得較好治療效果的干細(xì)胞移植途徑尚未確定。本實(shí)驗(yàn)主要探索體外誘導(dǎo)BMSCs分化為胰島素分泌細(xì)胞的最佳條件;比較
2、尾靜脈、腎被膜和胰腺內(nèi)注射三種干細(xì)胞移植途徑對(duì)糖尿病模型動(dòng)物的治療作用,以篩選出干細(xì)胞治療糖尿病的最佳移植途徑。
方法:全骨髓貼壁法分離大鼠BMSCs。體外擴(kuò)增后,部分細(xì)胞用于體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),即向培養(yǎng)體系中添加胰腺提取液、尼克酰胺、Exendin-4及不同濃度的葡萄糖;觀察分化細(xì)胞的形態(tài)變化;雙硫腙染色法(DTZ)鑒定胰島素分化細(xì)胞的生成;放射免疫法(RIA)檢測(cè)上清液中胰島素和C—肽水平。另一部分細(xì)胞進(jìn)行BrdU標(biāo)記。將標(biāo)
3、記的BMSCs,經(jīng)尾靜脈、腎被膜和胰腺內(nèi)注射三種途徑,移植入鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病模型小鼠體內(nèi)。于移植后3、7、14、28、42天測(cè)定血糖;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)移植細(xì)胞在胰腺中的遷移和分化;放射免疫學(xué)方法監(jiān)測(cè)胰島素及C-肽水平。
結(jié)果:(1)在高糖或低糖培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)因子尼克酰胺、Exendin-4,細(xì)胞趨向形成細(xì)胞團(tuán),高糖培養(yǎng)條件下細(xì)胞成團(tuán)趨勢(shì)更明顯。添加鼠胰腺提取液,細(xì)胞內(nèi)顆粒增多、細(xì)胞脫落、死亡。(2)誘導(dǎo)組
4、大部分細(xì)胞雙硫腙染色呈棕紅色,對(duì)照組細(xì)胞無(wú)陽(yáng)性著色。(3)誘導(dǎo)組細(xì)胞經(jīng)葡萄糖刺激后,能夠分泌胰島素和C-肽。(4)腹腔注射STZ3d后,小鼠血糖均≥16.7mmol/L,出現(xiàn)明顯多飲、多尿等癥狀,確定糖尿病模型造模成功。(5)尾靜脈、腎被膜及胰腺內(nèi)移植組與糖尿病模型對(duì)照組相比,血糖均有所降低,胰島素及C-肽均有所增加(P<0.05),尤以胰腺移植組血糖下降、胰島素和C-肽升高更為顯著。(6)尾靜脈和胰腺內(nèi)移植組的胰腺內(nèi)可見BrdU陽(yáng)性標(biāo)
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