弓形蟲感染妊娠中期小鼠對胎盤損傷作用的探討.pdf

1、目的：采用妊娠中期BALB/c小鼠作為動物模型，觀察：①弓形蟲感染妊娠中期小鼠后，是否影響孕鼠的健康和胎鼠的生長發(fā)育；②感染后孕鼠血清中絨毛膜促性腺激素、胎盤催乳素和雌三醇的含量是否受到影響；③感染后蟲體是否侵入孕鼠胎盤組織，造成胎盤組織病理性損傷；④感染后是否影響胎盤細胞的凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL、TNF—α的表達。通過以上實驗，從胎盤結(jié)構(gòu)、功能和內(nèi)分泌角度，來較系統(tǒng)地分析和推導弓形蟲感染妊娠中期宿主出現(xiàn)

2、不良妊娠的機制。 方法：將40只妊娠中期小鼠隨機分為感染組和正常對照組，每組20只。在妊娠第8天，感染組經(jīng)腹腔無菌接種純化的弓形蟲速殖子懸液(100個速殖子/0.2mlPBS/只)；正常對照組注射等量無菌PBS(0.01mol/L，pH=7.4)。觀察孕鼠的健康狀況，于妊娠第12、14、16、18天隨機、分批取感染組和正常對照組孕鼠各5只，摘眼球取血，收集血清，頸椎脫臼處死，分離胎盤和胎鼠。①解剖顯微鏡下觀察胎鼠存活情況，電子天

3、平稱量胎盤和胎鼠的重量，游標卡尺測量胎鼠的體長和尾長；②放射免疫分析法測定孕鼠血清中絨毛膜促性腺激素、胎盤催乳素和雌三醇的含量；③瑞姬氏染色觀察腹腔液、羊水和胎盤組織中是否有弓形蟲存在，蘇木素—伊紅(HE)染色觀察胎盤組織的病理損傷情況；④流式細胞技術(shù)檢測胎盤細胞凋亡率，分光光度法測定胎盤組織半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)酶的活性；⑤免疫組織化學法檢測胎盤組織中細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及TNF—

4、α的表達量。 結(jié)果：①正常對照組孕鼠無異常體征，隨著妊娠天數(shù)的增加，胎盤重量先增后減，胎盤系數(shù)逐步降低，胎鼠重量、體長和尾長不斷增加；感染組孕鼠隨著妊娠天數(shù)的增加，體重逐漸降低，出現(xiàn)豎毛、倦怠、采食量減少等異常表現(xiàn)，并有流產(chǎn)現(xiàn)象，死胎和吸收胎明顯增多。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較，差異均有統(tǒng)計學意義(胎盤重量：F正常對照組=88.610、F感染組=21.906，胎鼠重量：F正常對照組=1695.874、F感染組=284.801，胎盤系

5、數(shù)：F正常對照組=165.930、F感染組=100.011，胎鼠體長：F正常對照組=649.255、t感染組=5.391，胎鼠尾長：F正常對照組=503.761、t感染組=6.267；P＜0.001)；組間相同妊娠天數(shù)的比較，第12天的胎盤系數(shù)，第14、16天的胎盤、胎鼠重量和胎鼠尾長，第16天的胎鼠體長，感染組均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。②放射免疫測定顯示：感染組和正常對照組孕鼠血清絨毛膜促性腺激素的含量均隨著

6、妊娠天數(shù)的增加而降低，但在妊娠第18天時，正常對照組有輕微的升高；胎盤催乳素和雌三醇的含量均隨著妊娠天數(shù)的增加而升高，但在妊娠第18天時，感染組有輕微的降低。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較，差異均有統(tǒng)計學意義(絨毛膜促性腺激素：F正常對照組=19.306、F感染組=57.620，胎盤催乳素：F正常對照組=17.449、F感染組=46.720，雌三醇：F正常對照組=239.546、F感染組=22.841；P＜0．001)；組間相同妊娠天數(shù)的比較，

7、三種激素的含量感染組均低于正常對照組，但僅妊娠第16天和第18天的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。③瑞姬氏染色和HE染色顯示：感染組孕鼠妊娠第12天的腹腔液、羊水和胎盤組織中均未見弓形蟲，病理損傷不明顯；妊娠第14天的腹腔液和羊水中可見弓形蟲速殖子，但胎盤組織中未見蟲體，可見淋巴細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞侵潤，偶見凋亡小體；妊娠第16天的腹腔液和羊水中速殖子數(shù)目明顯增多，并有假包囊，胎盤組織中也有速殖子，可見部分滋養(yǎng)細胞破壞，胎盤絨

8、毛出現(xiàn)炎性改變；到妊娠第18天，蟲體數(shù)目進一步增多，胎盤絨毛血管減少，滋養(yǎng)層細胞縮小，胞漿濃縮，核質(zhì)致密，可見大量的凋亡小體。④細胞凋亡檢測顯示：感染組和正常對照組孕鼠胎盤細胞凋亡率及Caspase-3酶的活力單位均隨著妊娠天數(shù)的增加而升高。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較，差異均有統(tǒng)計學意義(細胞凋亡率：F正常對照組=114.333、F感染組=200.417，Caspase-3酶的活力單位：F正常對照組=14.940、F感染組=15.212；P

9、＜0.01)；組間相同妊娠天數(shù)的比較，感染組孕鼠胎盤細胞凋亡率及酶活力單位均高于正常對照組，除妊娠第18天的胎盤Caspase-3酶活力單位外，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。⑤免疫組化檢測顯示：感染組和正常對照組孕鼠胎盤組織中的細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及 TNF—α在胎盤絨毛和蛻膜中均有表達，以合體滋養(yǎng)細胞表達較多。感染組和正常對照組孕鼠Bax、Fas、FasL及TNF—α的表達量均隨著妊娠天數(shù)的增加而

10、增加，Bcl-2的表達量均隨著妊娠天數(shù)的增加而減少。組內(nèi)不同妊娠天數(shù)的比較，差異均有統(tǒng)計學意義(Bax：F正常對照組=387.316、F感染組=76.059，Bcl-2：F正常對照組=255.026、F感染組=552.733，F(xiàn)as：F正常對照組=591.607、F感染組=1131.261，F(xiàn)asL：F正常對照組=82.598、F感染組=159.749，TNF—α：F正常對照組=74.774、F感染組=105.678；P=0.000)；

11、組間相同妊娠天數(shù)的比較，感染組孕鼠Bax、Fas、FasL及TNF—α的表達量均高于正常對照組，Bcl-2的表達量均低于正常對照組。除妊娠第12天的TNF—α，第14天和第16天的Bax和Bcl-2外，表達量差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結(jié)論：①弓形蟲感染妊娠中期小鼠，蟲體可能先在腹腔中大量繁殖，再擴散至羊水和胎盤組織，經(jīng)口感染和經(jīng)血液傳播致先天性弓形蟲病的發(fā)生。②弓形蟲感染妊娠中期小鼠，蟲體侵入胎盤組織，可致胎盤絨毛

12、血管減少，部分滋養(yǎng)細胞破壞，絨毛出現(xiàn)炎性病理改變，影響胎盤對胚胎所需營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運。③弓形蟲感染妊娠中期小鼠，可致胎盤組織中的細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Fas、FasL及TNF—α表達量增加，Bcl-2表達量減少，啟動內(nèi)、外源性的細胞凋亡途徑，激活凋亡效應酶Caspase-3，使胎盤細胞凋亡增加，進而使滋養(yǎng)細胞浸潤子宮蛻膜及子宮螺旋小動脈的能力下降，以致胎盤血管網(wǎng)形成不良和螺旋小動脈重鑄過程受阻，致使胎盤低灌注、缺氧、缺血。④胎盤的完整性