廣東省豬群和執(zhí)業(yè)人群流感病毒血清學(xué)調(diào)查及新型PICV載體流感疫苗免疫保護(hù)效果評(píng)價(jià).pdf

1、A型流感病毒宿主范圍廣泛，如：人、豬、禽、犬等。由于豬呼吸道上皮細(xì)胞的受體分布特性，豬可以被禽類(lèi)和人類(lèi)流感病毒感染，而豬流感病毒也可感染人。因此，豬被認(rèn)為是人、豬、禽流感病毒的天然“混合器”，豬流感病毒的常規(guī)監(jiān)測(cè)具有重要的公共衛(wèi)生安全學(xué)意義。目前抵抗流感病毒侵襲的最好方法是進(jìn)行疫苗免疫。但由于流感病毒基因組特征，病毒基因極不穩(wěn)定，進(jìn)化頻繁。疫苗形式及免疫策略有限，這使有效預(yù)防流感病毒的傳染和傳播變得困難。
　　為評(píng)估廣東地區(qū)豬群、

2、執(zhí)業(yè)人群感染多種亞型流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)，從2013年3月至2014年3月，分別從廣東省6個(gè)不同城市的生豬養(yǎng)殖場(chǎng)和活禽市場(chǎng)中分別采集豬群血清樣本，共6510份。其中，生豬養(yǎng)殖場(chǎng)樣本4910份，活禽市場(chǎng)樣本1600份。通過(guò)血凝抑制（HI）檢測(cè)血清中抗人類(lèi)、豬和禽流感病毒抗體的水平，同時(shí)分析各采樣城市地理位置、生長(zhǎng)階段（或活禽市場(chǎng)中存留時(shí)間）、季節(jié)等因素對(duì)血清陽(yáng)性率影響。通過(guò)單因素分析法，計(jì)算各因素對(duì)豬群感染不同流感病毒風(fēng)險(xiǎn)的影響。結(jié)果顯示，影響

3、豬群不同亞型流感病毒感染的主要因素為生長(zhǎng)階段（或活禽市場(chǎng)內(nèi)存留時(shí)間）和季節(jié)因素。在活禽市場(chǎng)中存留時(shí)間較長(zhǎng)的豬只，感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于養(yǎng)殖場(chǎng)的豬。廣東各地豬群在秋季感染流感病毒風(fēng)險(xiǎn)較其他季節(jié)高。此外與禽類(lèi)有密切接觸是豬群感染禽流感（及類(lèi)禽豬流感）的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　由2013年12月起至2014年1月，在廣東省各地選取符合條件的豬場(chǎng)工人，禽場(chǎng)工人，活禽市場(chǎng)工作人員以及寵物醫(yī)院獸醫(yī)進(jìn)行血清樣本采集，同時(shí)采集無(wú)長(zhǎng)期動(dòng)物接觸史的志愿

4、者血清作為對(duì)照。利用 HI試驗(yàn)檢測(cè)志愿者血清中抗人類(lèi)、豬、禽和犬流感病毒抗體的水平。運(yùn)用單因素分析方法計(jì)算不同因素（如，年齡、性別、工作種類(lèi)以及動(dòng)物接觸情況等）對(duì)人類(lèi)血清抗體陽(yáng)性率的影響。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)工人感染經(jīng)典豬流感和歐亞類(lèi)禽豬流感的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于對(duì)照組。而禽場(chǎng)工人感染禽流感病毒AV/H7和AV/H9的風(fēng)險(xiǎn)則顯著高于非禽類(lèi)接觸人群?；钋菔袌?chǎng)工作人員感染AV/H5、AV/H7和 AV/H9的風(fēng)險(xiǎn)高于其他執(zhí)業(yè)人群?；钋菔袌?chǎng)工作人員感染豬

5、流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)也高于對(duì)照組人群。該結(jié)果提示活禽市場(chǎng)工作人員同時(shí)面臨兩種不同宿主的流感病毒感染風(fēng)險(xiǎn)。
　　Pichinde病毒（PICV）屬于沙粒病毒科，沙粒病毒屬成員，是雙義編碼RNA病毒。在感染初期主要攻擊巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，并引起高水平的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。本研究將流感病毒PR8毒株的HA和NP基因同時(shí)嵌合到PICV載體上，構(gòu)建成重組表達(dá)載體rP18tri-HA/NP。重組PICV嵌合表達(dá)流感的HA和NP蛋白。通過(guò)免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)

6、載體疫苗能有效誘導(dǎo)小鼠機(jī)體產(chǎn)生HA蛋白特異性中和抗體和NP蛋白特異性殺傷性T細(xì)胞免疫反應(yīng)（CTLs）。利用MHC四聚體染色法（MHC Tetramer stain）檢測(cè)特異性CTLs數(shù)量，結(jié)果顯示首免后，小鼠CTL反應(yīng)水平顯著提高,并在二免后，該類(lèi)型細(xì)胞數(shù)量仍能維持較高水平。不同分支或亞型流感毒株進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果顯示免疫小鼠均能獲得較好的交叉保護(hù)作用。評(píng)價(jià)機(jī)體抗載體免疫反應(yīng)對(duì)疫苗免疫效果的影響，結(jié)果顯示抗載體免疫反應(yīng)會(huì)抑制疫苗誘導(dǎo)