小鼠卵泡發(fā)育過(guò)程中miRNA-383和MiRNA-320的功能研究.pdf

1、我們之前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在TGF-β1刺激小鼠卵巢顆粒細(xì)胞(GC)中，microRNA-383(miR-383)和microRNA-320(miR-320)是兩個(gè)下調(diào)比較明顯的microRNAs。但是在卵泡發(fā)育的過(guò)程中，miR-383和miR-320在顆粒細(xì)胞中的功能和作用機(jī)制還不清楚，在本文的第一個(gè)研究中miR-383主要表達(dá)在小鼠不同發(fā)育階段的卵泡的顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞中。在顆粒細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-383后能夠通過(guò)結(jié)合RNA結(jié)合基序，單

2、鏈結(jié)合蛋白1（RBMS1）3'UTR促進(jìn)雌激素的分泌。miR-383通過(guò)影響RBMS1 mRNA的穩(wěn)定性來(lái)抑制其表達(dá)。從而又影響c-Myc（RBMS1的一個(gè)下游基因）的表達(dá)。過(guò)表達(dá)RBMS1和c-Myc能夠抑制miR-383促進(jìn)激素生成的效應(yīng)。在顆粒細(xì)胞中降低類固醇生成因子1(SF-1)的表達(dá)顯著地抑制Sarcoglycanzeta(SGCZ)(miR-383宿主基因)，miR-383的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物和成熟體的表達(dá)，這說(shuō)明miR-383被S

3、F-1轉(zhuǎn)錄激活。熒光素酶報(bào)告基因和染色體免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)顯示SF-1特異的結(jié)合在SGCZ的啟動(dòng)子區(qū)而且可以激活miR-383和SGCZ的表達(dá)。另外SF-1參與miR-383，RBMS1和c-Myc介導(dǎo)的顆粒細(xì)胞雌激素的分泌。這些結(jié)果表明miR-383通過(guò)靶向RBMS1或部分使c-Myc失活來(lái)促進(jìn)雌激素的生成。在顆粒細(xì)胞中SF-1促進(jìn)miR-383的轉(zhuǎn)錄和功能。
　　 在21天小鼠卵巢中，miR-320的表達(dá)隨著PMSG處理時(shí)間

4、的增加而顯著降低。miR-320主要表達(dá)于各級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞中，miR-320的表達(dá)與卵巢的發(fā)育呈負(fù)相關(guān)。FSH刺激顆粒細(xì)胞后，miR-320的表達(dá)隨著時(shí)間和劑量的增加顯著下調(diào)。在顆粒細(xì)胞中miR-320通過(guò)靶向SF-1和E2F1可以顯著抑制顆粒細(xì)胞增殖和雌激素的生成。過(guò)表達(dá)和沉默SF-1和E2F1的表達(dá)能夠回復(fù)和增強(qiáng)miR-320介導(dǎo)的顆粒細(xì)胞增殖和雌激素的分泌。在不同發(fā)育時(shí)期和PMSG處理的小鼠卵巢中，miR-320的表達(dá)

5、與SF-1/E2F1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。以上結(jié)果說(shuō)明miR-320通過(guò)靶基因SF-1和E2F1調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖和激素分泌功能。卵巢囊內(nèi)注射miR-320慢病毒顯著促進(jìn)血清中睪酮和孕酮的分泌而抑制雌激素的分泌。這些數(shù)據(jù)表明miR-320在小鼠卵泡發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。
　　 綜合以上研究，在卵泡的發(fā)育過(guò)程中，miRNA-383和miRNA-320通過(guò)不同的靶基因來(lái)調(diào)控小鼠顆粒細(xì)胞的增殖和激素分泌。對(duì)miRNAs的生成調(diào)控和功能的研