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文檔簡介
1、目的:
在前期的研究中,我們發(fā)現(xiàn)miR-4530在糖尿病伴視網(wǎng)膜病變的病人血清中上調(diào),在線miRNA靶基因預測數(shù)據(jù)庫顯示miR-4530其中一個靶基因是VASH1,并且在人臍靜脈內(nèi)皮細胞中進行了初步的驗證,確定了miR-4530具有促進內(nèi)皮細胞形成血管結(jié)構(gòu)的活性。在本研究中,我們的研究目的是探索是否miR-4530促進血管形成的能力能否用于調(diào)控腫瘤血管的形成,從而在抑制腫瘤血管形成的治療方法上,提供一個新的靶點和思路。
2、 方法:
1)我們通過給兩種乳腺癌細胞株MDA-MB-231和MCF-7轉(zhuǎn)染miR-4530的干擾質(zhì)粒,構(gòu)建了穩(wěn)定干擾miR-4530的細胞株,包括高表達株、低表達株和空載對照細胞株。
2)測定干擾后細胞的各項細胞功能及相關(guān)的mRNA和蛋白質(zhì)的表達。包括血管形成實驗、細胞增殖、細胞周期和凋亡、克隆形成實驗和VASH1的mRNA和蛋白水平表達量。
3)將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MDA-MB-231細胞株接種到2個月大的雌
3、性裸小鼠的皮下,并監(jiān)視成瘤情況及記錄成瘤體積。
結(jié)果:
1)通過熒光定量檢測轉(zhuǎn)染后的單克隆細胞株miR-4530的表達量,篩選出來了穩(wěn)定干擾的細胞株。
2)高表達miR-4530后,兩種乳腺癌細胞株均表現(xiàn)為增殖能力降低,凋亡比率增加,VASH1的mRNA和蛋白表達水平都明顯降低,但其成管能力明顯增強;低表達miR-4530后,細胞增殖能力有所增強,凋亡減少,VASH1的mRNA與蛋白表達水平有一定的增加,但
4、其成管能力明顯被抑制。
3) MDA-MB-231細胞高表達miR-4530后,其生存能力降低,接種到雌性裸小鼠皮下后,成瘤率低,生長速度慢,瘤體小。低表達miR-4530后,早期生長速度與對照組并無差異,待瘤體積增大后,生長速度不及對照組,且不斷變慢。
結(jié)論
1)高表達miR-4530通過降低VASH1的表達,增強乳腺癌細胞透導血管形成的能力,但同時會抑制乳腺癌細胞本身的生長能力。低表達miR-4530能
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