轉(zhuǎn)錄因子FOXM1不同剪接異構(gòu)體在乳腺癌EMT過程中的功能研究.pdf

1、乳腺癌作為威脅女性健康最為常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在中國上升趨勢明顯。乳腺癌細(xì)胞的生長特性是：能無限生長、具有轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移能力。因此對乳腺癌進(jìn)行增殖、轉(zhuǎn)移等作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，為腫瘤治療方案及臨床耐藥提供新的靶點。
　　選擇性剪接是指將同一種前體 mRNA剪接成多種不同的成熟 mRNA剪接變異體，進(jìn)而產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和功能不同的蛋白質(zhì)的過程。mRNA的選擇性剪接是真核生物產(chǎn)生蛋白質(zhì)多樣性與基因表達(dá)復(fù)雜性的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，在多種動物

2、組織中，至少90％蛋白編碼基因存在選擇性剪接現(xiàn)象。選擇性剪接導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的多樣性，與多細(xì)胞動物細(xì)胞增殖、分化和死亡密切相關(guān)。研究選擇性剪接的發(fā)生機(jī)制、調(diào)控以及相應(yīng)蛋白異構(gòu)體的功能對于腫瘤的診斷和治療具有重要的意義。
　　上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transitions，EMT)是指上皮類型細(xì)胞丟失上皮特性如細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用等現(xiàn)象，同時獲得了間質(zhì)表型如細(xì)胞移動能力增強(qiáng)。EMT在胚胎的正常發(fā)育

3、和組織器官的分化過程中扮演著重要的角色。EMT對胚胎的著床、原腸胚的形成、傷口愈合、組織再生和器官纖維化等生理和病理過程有重要作用，近年來研究認(rèn)為 EMT是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移尤其是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲行為的重要分子機(jī)制。
　　轉(zhuǎn)錄因子 FOXM1是叉頭框（Forkhead box）家族成員，被發(fā)現(xiàn)在多種類型腫瘤中都存在高表達(dá)，如乳腺癌、肺癌等。研究證實 FOXM1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起到了至關(guān)重要的作用，因而它也被認(rèn)為是預(yù)防腫瘤

4、發(fā)生和腫瘤治療的潛在靶基因。
　　目的：探究轉(zhuǎn)錄因子FOXM1不同的剪接異構(gòu)體對乳腺癌EMT過程中的影響。
　　方法：采用基因工程方法分別構(gòu)建了表達(dá) FOXM1B-EGFP和FOXM1C-EGFP兩種 FOXM1剪接異構(gòu)體真核表達(dá)質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)染進(jìn)乳腺癌細(xì)胞，采用RT-PCR和Western印跡檢測細(xì)胞樣本中FOXM1剪接異構(gòu)體的表達(dá)和EMT相關(guān)基因表達(dá)，同時采用transwell檢測高表達(dá)不同F(xiàn)OXM1剪接異構(gòu)體細(xì)胞的侵襲

5、和遷移能力。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了FOXM1B-EGFP和FOXM1C-EGFP真核表達(dá)質(zhì)粒。外源FOXM1B在乳腺癌間質(zhì)型細(xì)胞的表達(dá)高于上皮型細(xì)胞，并主要存在于細(xì)胞核內(nèi)，且高表達(dá)FOXM1B能夠顯著促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲和EMT過程。外源FOXM1C在乳腺癌上皮型細(xì)胞中的表達(dá)高于間質(zhì)型細(xì)胞，并且在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，高表達(dá)FOXM1C能夠顯著抑制細(xì)胞的侵襲和EMT過程。
　　結(jié)論：乳腺癌細(xì)胞中，F(xiàn)OXM1B主要存在于細(xì)