蘋(píng)果轉(zhuǎn)錄因子MdHB1在GA合成過(guò)程中的功能初探.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)階段都發(fā)揮著重要的作用，并參與多種激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。蘋(píng)果MdHB1是HD-Zip轉(zhuǎn)錄因子家族的一員。本試驗(yàn)以課題組前期得到的MdHB1過(guò)表達(dá)煙草‘NC89’植株和病毒誘導(dǎo)基因沉默(Virus-induced gene silencing，VIGS)處理的‘澳洲青萍’(Granny Smith)果實(shí)為試驗(yàn)材料，從轉(zhuǎn)錄水平和激素水平研究了MdHB1對(duì)于赤霉素合成代謝的影響;在這過(guò)程中，我們?cè)诖竽c桿菌中原核表達(dá)得到了

2、MdHB1的融合蛋白，以此為抗原通過(guò)新西蘭兔的免疫制備了MdHB1的多克隆抗體。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)將實(shí)驗(yàn)室前期克隆的MdHB1基因分別連接到pGEX-6p-1和pET-28a(+)兩個(gè)表達(dá)載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)BL21(DE3)，在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)下，表達(dá)得到了帶有GST和6×His標(biāo)簽的融合蛋白(分別命名為MdHB1-GST和MdHB1-His6)。Ni-NTA純化的融合蛋白MdHB1-H

3、is6為抗原經(jīng)成年兔免疫以制備多克隆抗體;經(jīng)間距酶聯(lián)免疫法(ELASA)檢測(cè)，所得抗體效價(jià)較高;蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)說(shuō)明所制備多克隆抗體不僅能從菌體總蛋白中特異性識(shí)別MdHB1，也能從蘋(píng)果幼葉總蛋白中成功檢測(cè)MdHB1蛋白;表明本實(shí)驗(yàn)所得多克隆抗體能夠用于進(jìn)一步的蛋白研究，深入挖掘MdHB1在植物體內(nèi)的功能。
　　(2)Western blot試驗(yàn)說(shuō)明，赤霉素合成抑制劑多效唑(Paclobutrazol，