轉(zhuǎn)錄因子Slug在乳腺癌中的功能研究.pdf

1、乳腺癌是威脅人類健康的重要疾病之一，目前在對于乳腺癌的多項研究中，“上皮-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)換EMT”過程在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮的作用越來越受到人們的重視。作為介導EMT過程的重要轉(zhuǎn)錄因子之一，Slug在EMT過程及其相關的腫瘤多個方面的作用已被廣泛認可并持續(xù)成為相關領域的熱點。
　　在本次研究中，通過慢病毒介導的RNA干擾以及后續(xù)對于相關表達譜芯片數(shù)據(jù)的分析，我們成功建立起Slug表達干擾的MDA-MB-231乳腺癌細胞

2、系研究系統(tǒng)，并在其中篩選出一系列表達受到Slug調(diào)控的相關基因，并最終將ARHGDIB基因確定為后續(xù)研究的靶標基因。通過定量PCR以及免疫印跡實驗的檢測，我們證實了在MDA231細胞中Slug對于ARHGDIB基因的表達在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平都確實存在著正向調(diào)控，但體外熒光素酶報告系統(tǒng)實驗顯示Slug對于ARHGDIB基因啟動子活性并不存在顯著的影響，表明Slug對于ARHGDIB的調(diào)控存在著更為深入的機制。
　　同時，通過在MDA23

3、1細胞中的RhoGTPases活性分析實驗，我們證實了Slug同RhoA蛋白的表達之間存在正相關，并對于Rac1以及Cdc42兩種RhoGTPase的表達和激活均存在著較為明顯的正向調(diào)控作用。進一步的通過免疫熒光實驗，我們對于RhoGDI2蛋白在細胞內(nèi)的表達定位進行了研究，結(jié)果表明細胞內(nèi)Slug基因的表達干擾會使得RhoGDI2蛋白更多的分布于細胞質(zhì)中，由此推測由Slug引起的RhoGDI2細胞內(nèi)定位改變可能對于Slug調(diào)控RhoGTP

4、ases的活性具有重要意義。
　　此外，通過進一步的深入探索，我們發(fā)現(xiàn)Slug對于RhoGTPases相關下游信號通路中重要蛋白JNK的表達、磷酸化水平以及AP-1家族成員c-Jun蛋白的表達也具有相應的正向調(diào)控作用;但同作為AP-1轉(zhuǎn)錄因子的重要成員之一，F(xiàn)ra1蛋白的表達卻在我們的實驗中被證實同Slug之間存在著反向的關系。另外，通過體外熒光素酶報告系統(tǒng)實驗，我們還發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)c-Jun蛋白的過表達對于ARHGDIB基因啟動子的