低表達(dá)let-7g在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的功能和機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌是目前全世界女性中最常見、最嚴(yán)重的惡性腫瘤之一，且發(fā)病率正在遞增。在發(fā)展中國家中，例如中國，乳腺癌每年都會造成數(shù)萬人的死亡和巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前的研究表明，乳腺癌是一種基因疾病，其發(fā)生和發(fā)展是一個涉及一系列遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)改變的多步驟過程。
　　 microRNA(miRNA)是一類長約21-24個堿基的內(nèi)源性小分子非編碼RNA。miRNA通過識別靶基因mRNA3'UTR上的互補(bǔ)位點(diǎn)來抑制靶基因的表達(dá)。由于每一個miRN

2、A都能控制很多不同的靶基因，據(jù)估計超過650個人源miRNA分子就足以調(diào)節(jié)人類基因組編碼的三分之一以上的mRNA。目前，越來越來的證據(jù)表明miRNA參與調(diào)節(jié)許多生理活動，而miRNA調(diào)控異常經(jīng)常伴隨腫瘤等疾病的發(fā)生。早期很多的文獻(xiàn)報道過一類著名的抑癌基因：let-7家族，但是最近研究發(fā)現(xiàn)在不同類型的癌癥中或者同一癌癥發(fā)展的不同階段，let-7家族成員的表達(dá)量并不完全相同，有的甚至?xí)l(fā)揮原癌基因的功能。因此，本論文的主要研究目標(biāo)是探討le

3、t-7家族在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中不同的作用以及相關(guān)的分子機(jī)制。
　　 我們首先通過原位雜交技術(shù)在85例乳腺癌臨床病例和21例正常乳腺組織中檢測let-7家族九個成員的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)唯有l(wèi)et-7g的表達(dá)下降與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及乳腺癌患者較差的預(yù)后有關(guān)。隨后，利用細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)以及原位注射和尾靜脈注射模型，我們發(fā)現(xiàn)在低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MCF-7中降低let-7g的表達(dá)明顯提高其侵襲和轉(zhuǎn)移能力，而在高轉(zhuǎn)移細(xì)

4、胞系MDA-MB-231中升高let-7g的表達(dá)量則大大降低其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，低表達(dá)let-7g促進(jìn)低轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移和侵襲能力主要依賴于上調(diào)GAB2和FN1這兩個靶基因的表達(dá)以及由此引發(fā)的p44/42MAPK信號通路的激活和間質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2/MMP-9的活化。同時，我們發(fā)現(xiàn)let-7g是let-7家族中對GAB2和FN1的3'UTR抑制作用最為明顯的miRNA。最后，我們發(fā)現(xiàn)雌激素與表皮生長因子的治療能

5、特異地下調(diào)let-7g的表達(dá)，并可通過增加GAB2和FN1的表達(dá)，以及激活p44/42MAPK信號通路來進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。因此，我們認(rèn)為let-7g是let-7家族中唯一的可作為乳腺癌臨床診斷和預(yù)后的指標(biāo)，并提出通過let-7g等信號分子形成的E2/EGF→p44/42MAPK→let-7g→GAB2/FN1→p44/42MAPK→MMP-2/MMP-9級聯(lián)通路來促進(jìn)乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的模型。
　　 總之，let-7家族在乳腺癌