CA IX在人乳腺癌中的表達及其對遷移和侵襲轉移影響的研究.pdf

1、乳腺癌是嚴重威脅女性身心健康的惡性腫瘤之一，而乳腺癌的復發(fā)和轉移是影響其療效的主要因素。因此，迫切需要尋找一個敏感性好且能較早預測乳腺癌轉移的分子生物學標記物及能夠抑制其遷移運動和轉移的治療靶點，為臨床對乳腺癌的復發(fā)和轉移做出早期預測提供一定的參考依據，從而有助于及時采取更加有效的治療措施。缺氧是包括乳腺癌在內的惡性實體瘤發(fā)展過程中普遍存在的現象。為了適應或克服缺氧環(huán)境，腫瘤組織內部會發(fā)生一系列包括無氧代謝增加、細胞凋亡抑制、新生血管形

2、成、腫瘤局部浸潤和轉移能力增強等在內的缺氧反應。缺氧反應通過缺氧誘導因子HIF-1α來啟動和調節(jié)，從而形成一系列由HIF-1α介導的缺氧反應調控通路，其下游CAⅨ被認為是一種可靠的缺氧標記物，不僅能調節(jié)細胞酸堿平衡、介導細胞間信息交流，還與細胞黏附以及腫瘤的惡性進展關系密切。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：人乳腺癌組織CAⅨ的表達及其與臨床參數的關系。
　　目的：闡明人乳腺癌組織中CAⅨ的表達情況及其與臨床參數（包括預后

3、）的關系。
　　方法：采用免疫印跡(Western blot)的方法檢測11例人乳腺癌組織及對應正常組織中CAⅨ的表達情況;采用IHC的方法在149例人乳腺癌組織標本中研究CAⅨ的表達及其與臨床參數（包括預后）的關系。
　　結果：11例乳腺癌組織及對應的正常組織經Western blot方法檢測CAⅨ蛋白表達水平，結果提示CAⅨ蛋白在部分乳腺癌組織中高表達，而在乳腺正常組織中幾乎不表達或低表達，CAⅨ蛋白在乳腺癌組織中的表達

4、顯著高于正常乳腺組織(p＜0.001);IHC的結果顯示，CAⅨ蛋白的表達主要定位于細胞膜;在149例乳腺癌標本中，22例樣本中的癌細胞CAⅨ表達陽性，陽性率為14.77％; CAⅨ的表達與腫瘤大小(p=0.019)、淋巴結轉移(p=0.006)、遠處轉移(p＜0.001)和臨床分期(p=0.003)具有顯著的相關性;149例人乳腺癌組織的Kaplan-Meier生存分析揭示，CAⅨ的高表達與乳腺癌患者較短的生存期之間有顯著的相關性（x

5、2=41.080，p＜0.001）;單、多因素生存分析顯示CAⅨ蛋白在乳腺癌患者預后分析中是一個獨立的有預后意義的分子指標(p＜0.001，HR=5.758，95％ CI:2.286-14.502)。
　　結論：CAⅨ蛋白在部分乳腺癌組織中高表達，而在乳腺正常組織中幾乎不表達或低表達，CAⅨ蛋白在乳腺癌組織中的表達顯著高于正常乳腺組織;CAⅨ蛋白與腫瘤大小、淋巴結轉移、遠處轉移、臨床分期及生存期具有顯著相關性;缺氧標記物CAⅨ蛋白

6、在乳腺癌患者預后分析中是一個獨立的有意義的分子指標。
　　第二部分：CoCl2誘導的CAⅨ表達對人乳腺癌細胞遷移和侵襲轉移的影響。
　　目的：明確缺氧誘導的CAⅨ表達變化及其對人乳腺癌細胞遷移和侵襲轉移的影響。
　　方法：選用兩株人乳腺癌細胞（高侵襲性的乳腺癌細胞MDA-MB-231、低侵襲性的乳腺癌細胞MCF-7），利用CoCl2模擬缺氧環(huán)境來建立缺氧模型。實驗細胞分為對照組和缺氧組，細胞同步化24小時后，對照組細胞

7、培養(yǎng)于含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中，缺氧組細胞培養(yǎng)于含CoCl2終濃度為200μmol/L的缺氧誘導培養(yǎng)基中，兩組均在37℃、5％CO2、95％空氣、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48、72小時;采用Western blot的方法檢測細胞HIF-1α和CAⅨ蛋白的表達變化;采用Transwell遷移實驗研究其體外遷移運動能力的變化;采用Transwell侵襲實驗研究其體外侵襲運動能力的變化。
　　結果：體外實驗表明，與對照組相比，

8、缺氧組細胞經200μmol/L CoCl2處理24h、48h、72h后HIF-1α蛋白的表達均有所上調;經CoCl2處理24h、48h后，CAⅨ蛋白的表達量下降，但差異沒有統計學意義，處理72h后，CAⅨ的蛋白表達顯著上調;CoCl2作用24h后，與對照組相比，缺氧組細胞體外遷移運動和侵襲能力下降，作用72h后，與對照組相比，缺氧組細胞體外遷移運動和侵襲能力明顯提高。
　　結論：CoCl2誘導的化學缺氧能有效上調HIF-1α和CA