人精子蛋白SP22單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立及臨床應(yīng)用.pdf

1、精子蛋白22(spermprotein22，SP22)是一種由常染色體的持家基因編碼的蛋白。大鼠SP22主要分布于心、肺、腦、肝、腎、前列腺、睪丸、輸精管、附睪等組織，以睪丸中含量最多。同樣，人各組織均表達(dá)SP22，表達(dá)量較多的組織是心臟、肌肉組織、胰腺、垂體、腎上腺、甲狀腺和唾液腺等。在精子發(fā)生過(guò)程中，SP22mRNA在粗線期精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞和圓形精子期均有轉(zhuǎn)錄，但其蛋白卻在精子發(fā)生后期出現(xiàn)。SP22作為一種新的生殖相關(guān)蛋白，既

2、具有酶活性，也具有調(diào)節(jié)因子和致癌因子的特性。精子表面SP22能與透明帶結(jié)合，輔助精子穿透卵細(xì)胞直接參與頂體反應(yīng)。若建立SP22的免疫學(xué)檢測(cè)方法并探討其在男性生殖系統(tǒng)中的具體功能、作用機(jī)制以及與男性不育的關(guān)系等，就必須得到大量的純化SP22抗原和相應(yīng)的抗體。 本研究第一部分，應(yīng)用已有的重組菌株誘導(dǎo)表達(dá)。并用鎳離子親和層析柱對(duì)重組SP22蛋白進(jìn)行純化，行SDS-PAGE鑒定，結(jié)果獲得了高純度較的SP22重組蛋白。 第二部分，

3、采用雜交瘤技術(shù)將無(wú)分泌功能的骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與分泌SP22抗體的小鼠脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，利用瘤細(xì)胞無(wú)限增殖及免疫細(xì)胞分泌抗體的能力，大量制備針對(duì)SP22抗原的單克隆抗體(McAb)。首先以重組SP22作為抗原免疫BALB/c小鼠，免疫成功后取小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合，通過(guò)陽(yáng)性克隆有限稀釋法，得到3株IgG1類SP22McAb的雜交瘤細(xì)胞株；再將生長(zhǎng)良好的雜交瘤細(xì)胞接種到石蠟油預(yù)處理的BALB/c小鼠腹腔中，制備腹

4、水型抗人SP22McAb。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)證明混合腹水的滴度可達(dá)1:1000～1:3200；Western印跡鑒定表明該McAb能特異性地結(jié)合精子膜蛋白中分子量(Mr)為22000的SP22。 第三部分，應(yīng)用自制SP22McAb，通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)等方法研究了精子SP22的定位、含量，并比較了SP22含量與精子相關(guān)參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果SP22蛋白的免疫染色在精子的頂體部位。FCM結(jié)果顯示，正常人精子